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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教植物遗传转化中关于农杆菌的活力
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yxingying

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请教植物遗传转化中关于农杆菌的活力

请问各位朋友，大家在做植物遗传转化采用农杆菌介导下胚轴时，如果所需菌液浓度为OD=0.8-1.0，是一摇到这个浓度，还是一摇24小时，再吸取一定量菌液二摇到所需浓度？哪种方法菌活力高一些，更有利于转化？
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1楼 2013-05-17 14:34:52
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selenazm

新虫 (初入文坛)
植物遗传转化农杆菌的活力是比较重要的一点。一般共有几个OD浓度需要考虑。一摇OD不是太关键，一般转化前几天重新活化到平板，培养48h，再挑取单克隆24h即可。二摇（应该叫活化），直接按5%取菌液活化到新的液体培养基，至OD0.6~0.8就好。一般5h的培养就能满足要求。这一步决定了菌体的活力，让收集菌体中的活菌的比例较高。然后是侵染液，一般用将活化好的菌体收集后，按体积换算重悬到转化所需的液体共培养基中就行，一般OD0.6~1.0都有选择，这个可以自己摸索一下。如果还需要提高转化效率，可以考虑加乙酰丁香酮，一般100~200mg/L。
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3楼2013-05-29 10:32:32
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-05-18 07:48:26
我觉得都可以. 如果你的目的是做转基因植物, 农杆菌的浓度摇大了也没有关系, 照做(当然不能摇个3天才收).
以上是个人经验
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2楼2013-05-17 15:40:03
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