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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么质粒DNA加入loading buffer 后会漂样
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2009107082

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么质粒DNA加入loading buffer 后会漂样

我用天根质粒小提试剂盒提取质粒，电泳前加入10乘的loading buffer，上样时，样品都漂出来了，不能沉淀下去，跑出的胶也没有沉淀。但是用自制的溶液提取质粒，上样就没问题，请问这是什么原因。
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1楼2013-05-07 12:04:45
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
2009107082(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-07 16:50:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by 2009107082 at 2013-05-07 13:27:31
是的啊，就是混匀后加，样就浮出来了。...

换个loading buffer 试试看，我们都是用TAKARA酶包装里面的loading buffer
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一花一世界、一叶一菩提
4楼2013-05-07 14:49:41
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 18:59:26
样品中有酒精残留，在洗脱前再高速离心一次，然后室温放置几分钟，让酒精都挥发掉，就没问题了
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8楼2013-05-07 22:50:12
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PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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2009107082: 金币+2 2013-05-10 08:46:38
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 18:59:41
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 19:00:54
上面的网友把问题点基本都说出来了:
主要是,质粒提取,最后一步乙醇清洗后，乙醇没有挥发净,导致你溶出的质粒中含有醇,电泳时容易漂浮,难沉降.

解决问题方法：
1、若提出的质粒样品很多，可以重新乙醇精制，70%乙醇清洗后，要晾干至没有乙醇的味道，再溶出质粒。
2、电泳时，loading buffe使用量加大。
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14楼2013-05-08 22:55:00
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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没见过这种现象，不都是先混匀后再加样，
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一花一世界、一叶一菩提
2楼2013-05-07 12:21:03
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2009107082

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 12:21:03
没见过这种现象，不都是先混匀后再加样，

是的啊，就是混匀后加，样就浮出来了。
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3楼2013-05-07 13:27:31
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我是钢镚

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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2009107082(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-07 16:50:25
gyesang: 金币+1, 鼓励发贴交流，为楼主问题解决提供可能的线索！ 2013-05-29 18:59:59
我认为是loading buffer有问题，你可以补加蔗糖或者甘油
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5楼2013-05-07 14:51:44
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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2009107082(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-05-07 16:50:32
我们也是使用takara的loading buffer的，从来没有问题
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6楼2013-05-07 15:38:16
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2009107082

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 14:49:41
换个loading buffer 试试看，我们都是用TAKARA酶包装里面的loading buffer...

请问，会不会是试剂盒里TE有问题，怎么我用自己配置试剂来提取质粒，跑胶就没有问题。有哪些原因会影响DNA的沉淀啊。。。
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7楼2013-05-07 16:00:31
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8601

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那你多加点buffer试试吧。我们是自己配2X的loading buffer. 其中甘油占10%。
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9楼2013-05-08 00:57:21
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 19:00:23
是因为质粒最后所在的buffer引起的, 简单的解决办法是楼主你把你的10x loading buffer当成3x左右的来用.
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10楼2013-05-08 03:46:42
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