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2009107082

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么质粒DNA加入loading buffer 后会漂样

我用天根质粒小提试剂盒提取质粒,电泳前加入10乘的loading buffer,上样时,样品都漂出来了,不能沉淀下去,跑出的胶也没有沉淀。但是用自制的溶液提取质粒,上样就没问题,请问这是什么原因。
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PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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2009107082: 金币+2 2013-05-10 08:46:38
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-05-29 18:59:41
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 19:00:54
上面的网友把问题点基本都说出来了:
主要是,质粒提取,最后一步乙醇清洗后,乙醇没有挥发净,导致你溶出的质粒中含有醇,电泳时容易漂浮,难沉降.

解决问题方法:
1、若提出的质粒样品很多,可以重新乙醇精制,70%乙醇清洗后,要晾干至没有乙醇的味道,再溶出质粒。
2、电泳时,loading buffe使用量加大。
14楼2013-05-08 22:55:00
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


2009107082(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-07 16:50:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by 2009107082 at 2013-05-07 13:27:31
是的啊,就是混匀后加,样就浮出来了。...

换个loading buffer 试试看,我们都是用TAKARA酶包装里面的loading buffer
一花一世界、一叶一菩提
4楼2013-05-07 14:49:41
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-29 18:59:26
样品中有酒精残留,在洗脱前再高速离心一次,然后室温放置几分钟,让酒精都挥发掉,就没问题了
8楼2013-05-07 22:50:12
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普通回帖

乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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没见过这种现象,不都是先混匀后再加样,
一花一世界、一叶一菩提
2楼2013-05-07 12:21:03
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2009107082

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 12:21:03
没见过这种现象,不都是先混匀后再加样,

是的啊,就是混匀后加,样就浮出来了。
3楼2013-05-07 13:27:31
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我是钢镚

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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2009107082(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-07 16:50:25
gyesang: 金币+1, 鼓励发贴交流,为楼主问题解决提供可能的线索! 2013-05-29 18:59:59
我认为是loading buffer有问题,你可以补加蔗糖或者甘油
5楼2013-05-07 14:51:44
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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2009107082(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-05-07 16:50:32
我们也是使用takara的loading buffer的,从来没有问题
6楼2013-05-07 15:38:16
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2009107082

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 14:49:41
换个loading buffer 试试看,我们都是用TAKARA酶包装里面的loading buffer...

请问,会不会是试剂盒里TE有问题,怎么我用自己配置试剂来提取质粒,跑胶就没有问题。有哪些原因会影响DNA的沉淀啊。。。
7楼2013-05-07 16:00:31
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8601

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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那你多加点buffer试试吧。我们是自己配2X的loading buffer. 其中甘油占10%。
9楼2013-05-08 00:57:21
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-29 19:00:23
是因为质粒最后所在的buffer引起的, 简单的解决办法是楼主你把你的10x loading buffer当成3x左右的来用.
10楼2013-05-08 03:46:42
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