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njcj

新虫 (小有名气)

[交流] 关于离子交换再生的问题!!疑惑啊!! 已有3人参与

DEAE Sepharose FF用了很久了,但有个问题一直想不明白。
我是用来分离蛋白质的,通常缓冲液pH8.5-9.0,让蛋白质带负电,结合后用NaCl洗脱,之后是再生,通常用高浓度的NaCl或低浓度的NaOH洗脱。
问题是:用NaCl或NaOH再生时,Cl-t和OH-离子已经和交换基团结合满了,再上样蛋白质时怎么又能和蛋白质结合呢?可能是蛋白质结合能力强吧。如果是蛋白质结合能力强,那怎么又能用NaCl或NaOH洗脱下来呢?
疑惑啊!!
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吸附时蛋白质所带的电荷会先构成竞争性吸附,在洗脱时氯化钠又和蛋白质竞争性吸附,氯化钠浓度越高竞争力越强,所以吸附得越紧的蛋白质在越高的氯化钠浓度时被洗脱。盐离子浓度是最常用的洗脱方式,除非迫不得已就别用氢氧化钠,因为氢氧化钠是强碱,得控制好,虽然不是所有蛋白质都不能耐受,但终归是会提高操作难度的。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2013-05-07 00:35:09
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