24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1262  |  回复: 9

Grace葡萄

新虫 (初入文坛)

[求助] southern blotting 实验问题求助!

探针的标记 是什么时候标记呢?我已经制备完探针了 保存在-20,没有加marker,这个怎么办?可以直接往里加吗?

酶切没有条带 DNA的浓度是500ng/ml 我加了15ul左右到体系里 体系是40ul 可是酶切之后什么都没有 没有带 点样孔里什么也没有  我用的是hind III  这是为什么呢?是DNA降解了吗?

southern 的图片 什么样的算是成功的呐?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-05 10:29:39
“酶切没有条带 DNA的浓度是500ng/ml 我加了15ul左右到体系里 体系是40ul 可是酶切之后什么都没有 没有带 点样孔里什么也没有”  
这种情况肯定是你的DNA在酶切过程被降解了,最有可能的是你用的水出问题了,检查一下你的水,用个不同来源的水试试。

不知道你的探针是用什么方法表的,同位素还是DIG?

探针里面加Marker?不是很懂,为什么要加marker?我做的时候,是从来没有加过的
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-05-04 19:21:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxf8470

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-05 10:29:51
先做预酶切,证明你的DNA没问题,酶切没问题,之后再转膜;转好的膜在4度冰箱放一两个星期是可以的,我们曾放过一个月的还能用。
之后再标记探针,忘了加Marker最好重新标记,否则大小分不清图是不能用的。
3楼2013-05-04 23:45:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Grace葡萄

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-05-04 19:21:19
“酶切没有条带 DNA的浓度是500ng/ml 我加了15ul左右到体系里 体系是40ul 可是酶切之后什么都没有 没有带 点样孔里什么也没有”  
这种情况肯定是你的DNA在酶切过程被降解了,最有可能的是你用的水出问题了,检查一 ...

我和同学一起做的 她的就有条带我的就没有 我们用的一样的水 应该不是水的问题吧 我的探针是DIG标记 我们需要加hind III maeker 但是我在制备探针的时候忘记加了
4楼2013-05-06 17:05:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Grace葡萄

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wxf8470 at 2013-05-04 23:45:56
先做预酶切,证明你的DNA没问题,酶切没问题,之后再转膜;转好的膜在4度冰箱放一两个星期是可以的,我们曾放过一个月的还能用。
之后再标记探针,忘了加Marker最好重新标记,否则大小分不清图是不能用的。

我的酶切电泳没有条带 什么都没有 但是杂交之后 阳性却有条带 但是转化的没有条带   必须加marker吗 我i在杂交之前有个变性探针的时候加可以吗
5楼2013-05-06 17:06:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxf8470

木虫 (小有名气)


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-20 20:17:33
Marker是用来指示大小的,同时加是因为想标记目的基因的探针时同时标记Marker, 当然也可以单独标记。事实上不加效果会更好,因为Marker也是标记了的dna, 会提高背景。
6楼2013-05-07 02:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Grace葡萄

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wxf8470 at 2013-05-07 02:33:36
Marker是用来指示大小的,同时加是因为想标记目的基因的探针时同时标记Marker, 当然也可以单独标记。事实上不加效果会更好,因为Marker也是标记了的dna, 会提高背景。

我还是不太懂为什么要加marker  为什么分开加也可以?
7楼2013-05-07 10:56:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxf8470

木虫 (小有名气)


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-20 20:17:36
胶上有Marker DNA, 容易检测,紫外灯下可见;转到膜上后就不易检测了。这时需要制备Marker DNA 特异的探针。可以跟目的基因探针放一起同时制备,也可以单独制备杂交时再跟目的基因探针同时加。
8楼2013-05-07 20:59:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

稻稻

铜虫 (著名写手)


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-20 20:17:41
是不是胶孔下面透了,都漏出去了
做一个不动声色的人,不准情绪化,不准回头看。
9楼2013-09-13 21:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

请问生物化学

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Grace葡萄 at 2013-05-06 17:06:50
我的酶切电泳没有条带 什么都没有 但是杂交之后 阳性却有条带 但是转化的没有条带   必须加marker吗 我i在杂交之前有个变性探针的时候加可以吗...

你好,我想问一下,你的探针和DNA的比例是多少呀。
10楼2017-11-18 11:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Grace葡萄 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 评审有感 +10 popular289 2026-05-18 16/800 2026-05-19 14:46 by popular289
[文学芳草园] 献血感触 +3 呀呀好傻 2026-05-19 3/150 2026-05-19 14:04 by jasswind
[有机交流] 反应很差,大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 3/150 2026-05-19 13:56 by xtlilibin
[考博] 找博士生导师 +6 小代想上岸 2026-05-15 7/350 2026-05-19 10:22 by free_fisher
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +10 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 11/550 2026-05-19 10:03 by 嘻嘻哈哈乐呵呵
[考博] 26/27申博自荐-锂/钠电池方向 5+3 狗头军师. 2026-05-15 4/200 2026-05-19 09:10 by moonboat
[基金申请] 别被青基扩招骗了!26年科研内卷才刚刚开始 +3 国自然国社科中 2026-05-14 4/200 2026-05-19 08:48 by archvillain
[基金申请] 面上本子正文33页,违规吗?会被低分嘛? +8 1234567wang 2026-05-17 10/500 2026-05-18 18:52 by zzahkj
[基金申请] 国自然上会要求 +5 无名者登山 2026-05-18 9/450 2026-05-18 17:50 by BlakeReary
[基金申请] 今年审到国自然15份,谈谈感受 +16 国自然国社科中 2026-05-17 16/800 2026-05-18 14:58 by gy116024
[硕博家园] 考博自荐 +5 科研狗111 2026-05-13 6/300 2026-05-18 11:22 by 糊糊涂涂好
[基金申请] 青C资助名额大幅增加! +12 西葫芦炒鸡蛋 2026-05-13 16/800 2026-05-18 10:02 by Equinoxhua
[基金申请] 重磅!青年科学基金项目(C类)资助增幅预计超过50% +7 水和泥不是水泥 2026-05-13 10/500 2026-05-18 07:50 by 水和泥不是水泥
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
[高分子] 本人最近太闲了,谁有问题可以提,每天会统一回复 +9 一切都是空工 2026-05-12 20/1000 2026-05-16 19:52 by Equinoxhua
[有机交流] 求有机合成大神指点三硫酸乙烯酯(CAS:2793408-99-6)的合成路线 30+3 Leekmid 2026-05-13 10/500 2026-05-16 16:37 by czyzsu
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +5 myrtle 2026-05-12 9/450 2026-05-15 15:27 by myrtle
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[考博] 材料类只有一篇综述能申博么 +4 乐逍遥谷 2026-05-13 4/200 2026-05-14 12:05 by zhyzzh
[论文投稿] 求助大佬sci投稿哪个好中 +3 江沅188 2026-05-12 4/200 2026-05-13 14:35 by 江沅188
信息提示
请填处理意见