24小时热门版块排行榜    

查看: 1433  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Grace葡萄

新虫 (初入文坛)

[求助] southern blotting 实验问题求助!

探针的标记 是什么时候标记呢?我已经制备完探针了 保存在-20,没有加marker,这个怎么办?可以直接往里加吗?

酶切没有条带 DNA的浓度是500ng/ml 我加了15ul左右到体系里 体系是40ul 可是酶切之后什么都没有 没有带 点样孔里什么也没有  我用的是hind III  这是为什么呢?是DNA降解了吗?

southern 的图片 什么样的算是成功的呐?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

稻稻

铜虫 (著名写手)

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-20 20:17:41
是不是胶孔下面透了,都漏出去了
做一个不动声色的人,不准情绪化,不准回头看。
9楼2013-09-13 21:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-05 10:29:39
“酶切没有条带 DNA的浓度是500ng/ml 我加了15ul左右到体系里 体系是40ul 可是酶切之后什么都没有 没有带 点样孔里什么也没有”  
这种情况肯定是你的DNA在酶切过程被降解了,最有可能的是你用的水出问题了,检查一下你的水,用个不同来源的水试试。

不知道你的探针是用什么方法表的,同位素还是DIG?

探针里面加Marker?不是很懂,为什么要加marker?我做的时候,是从来没有加过的
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-05-04 19:21:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxf8470

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-05 10:29:51
先做预酶切,证明你的DNA没问题,酶切没问题,之后再转膜;转好的膜在4度冰箱放一两个星期是可以的,我们曾放过一个月的还能用。
之后再标记探针,忘了加Marker最好重新标记,否则大小分不清图是不能用的。
3楼2013-05-04 23:45:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Grace葡萄

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-05-04 19:21:19
“酶切没有条带 DNA的浓度是500ng/ml 我加了15ul左右到体系里 体系是40ul 可是酶切之后什么都没有 没有带 点样孔里什么也没有”  
这种情况肯定是你的DNA在酶切过程被降解了,最有可能的是你用的水出问题了,检查一 ...

我和同学一起做的 她的就有条带我的就没有 我们用的一样的水 应该不是水的问题吧 我的探针是DIG标记 我们需要加hind III maeker 但是我在制备探针的时候忘记加了
4楼2013-05-06 17:05:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 23/1150 2026-11-07 06:49 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们,看完中央《从严治党》的决定后,对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
请填处理意见