| 查看: 1874 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
yanmeiliu金虫 (小有名气)
|
[交流]
有哪位在做菊花的原生质体培养吗？或者其他植物的原生质体培养液可以，求经验。 已有3人参与
|
||
|
如题，我现在做菊花的原生质体培养实验，本实验室没有师兄师姐做过，本科不是学生物的，理论知识比较少，导师也不给指导，所以所有的方法都是自己在摸索，但是现在每次酶解出的原生质体活力都非常的低，所以在培养的时候根本看不到细胞分裂，想了很多改善的方法都没有结果，现在都研二下学期了，很着急，感觉也进行不下去了，唉，每天都实验折磨的都要抑郁了，老板也在变本加厉的折磨我。 哪位前辈做过，能否给些指导？不胜感激。 |
回复此楼» 猜你喜欢
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有141人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有8人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有11人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有用KM8P 培养基的吗？有做菊科原生质体培养的吗？求指教。
已经有9人回复
- 赤霉菌原生质体制备，制不出来，求大神帮助~~~急~~~
已经有10人回复
- 原生质体融合检测问题
已经有4人回复
- 细菌原生质体制备加多少甘氨酸
已经有5人回复
- 青霉原生质体的制备
已经有3人回复
- 关于原生质体制备的问题
已经有24人回复
- 请教大家关于拟南芥保卫细胞原生质体分离
已经有5人回复
- 链霉菌原生质体法转化容易吗？
已经有5人回复
- 拟南芥 原生质体
已经有4人回复
- 真菌及其原生质体的拍照问题
已经有4人回复
- 原生质体单核化问题 急求！！！！！
已经有3人回复
- 【求助/交流】原生质体培养
已经有15人回复
- 【求助】被孢霉原生质体制备
已经有9人回复
- 【求助】看内生真菌的原生质体需要多少倍显微镜可见？形态如何。。
已经有4人回复
- 【求助/交流】拟南芥原生质体分离
已经有5人回复
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - APEPI: 64
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
3楼2013-05-01 16:17:53
yanmeiliu
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 311.9
- 散金: 44
- 帖子: 227
- 在线: 138.9小时
- 虫号: 1121440
- 注册: 2010-10-13
- 性别: MM
- 专业: 植物生理与生化
2楼2013-05-01 12:08:29
yanmeiliu
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 311.9
- 散金: 44
- 帖子: 227
- 在线: 138.9小时
- 虫号: 1121440
- 注册: 2010-10-13
- 性别: MM
- 专业: 植物生理与生化
|
好的，谢谢您。 下面是我做的具体的步骤： 酶解液的配置：1.5%纤维素酶+0.5%果胶酶+1%MES+0.5mol/L甘露醇 溶于CPW溶液中，55℃ 10min 然后调节ph=5.6，抽滤灭菌备用。 1、取生长35天左右的组培苗，把叶片切成1mm宽左右，在黑暗条件下酶解。 2、每隔2、4、6h 取样观察酶解情况，并检测活力。 3.纯化的过程如下：酶解结束后先过滤，然后1000rmp 5 min ,吸取粗提物注入另一个25%蔗糖的离心管的顶部， 离心1000rmp 3 min，看文献说是原生质体在酶解液和蔗糖溶液间形成一条绿色的带状，感觉我离心出来的并不明显啊。不知道为什么？？哪里出问题了？ 最后是有一条绿色的带状，但是不明显。纯化出来的原生质体感觉和纯化前没区别。并且感觉浪费了很多原生质体。。。操作有问题吗？ 还有，我选的材料用的是菊花的所有叶片，而不是顶芽上的叶片，是不是也有影响呢？ 最关键的是测活力的时候感觉很少原生质体是活的，我是采用番红花红T染色法测定原生质体活力。染液配制：将番红花红T溶于含有甘露醇0.5mol /L的CPW溶液巾，配成浓度为0.1%的染 液备用。取染液和原生质体悬浮液各一滴混合，静置染色3?5min.,光学显微镜下分别计数被染成红色的原生质体数和原生质体的总数，观察10个视野，3次重复。 到底是哪里出问题了？ 请高手帮忙分析一下。谢谢 |
4楼2013-05-01 20:58:39
嘣哆—abc
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 7129.5
- 红花: 5
- 帖子: 1442
- 在线: 199.4小时
- 虫号: 1266804
- 注册: 2011-04-15
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
初识楼主困境，小生倍有感触！依照楼主的实验目的，小生认为，是所选材料的部位上！虽然植物各个细胞均有一定的细胞全能性，只是这种潜能的大小上有(显著)差异！如生殖细胞>其它体细胞，分生组织(茎基部)细胞>其它组织细胞等等！呵呵～我想聪明的您应当找到答案了！(依照楼主发帖时间，这时菊科植物，尤其是菊花，在这个季节其脚芽特别多！您不妨选用它或根部分生组织！友情提醒，这部分组织材料若从土壤栽培的植物株取来的，要充分灭菌啊！) 一点儿愚见，见笑了！ 恭候佳音～ 愿你有个好心情！～ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
5楼2013-05-06 21:33:57
