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关于稀释平板计数法的疑问
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1.我用的浇注法，应该24h计数还是48h计数？ 2.长了24h后培养基表面的菌落很明显，但是培养基内部的菌就是一个小点点，很难看到，稀释倍数低的平板像是10倍100倍1000倍几乎全部都是一个点一个点大片大片的挺均匀根本看不清。这时该怎么计数呢？稀释度高的培养基内部也有一些点点，是表面和内部的都记上去吗？ 3.我一共做了7个梯度的十倍稀释。原菌液倒平板之前的OD是1.13了，稀释十倍之后变成0.13，稀释100倍是0.01，1000居然变成0了，后面的稀释度也是0左右。那这么看来菌液里的菌很少很少很少了，可是为什么平板计数后后面OD值是0的菌长出来的菌落还挺多啊，不数那些点点就差不多在30-300之间，数了差不多1000以上了。。。。 不懂怎么计数。我是想做一个CFU与OD之间关系的曲线来着。 是不是该等平板培养一段时间的同时要将相应稀释倍数的菌同等条件培养呢？是不是菌在平板里扩大培养了所以之前测的OD值是不对的？ [ Last edited by 襄阳蓉儿 on 2013-4-28 at 11:46 ] |
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1、你培养的是什么微生物?计数一般选择对数生长期，例如大肠杆菌通常24小时左右就可以进行菌落计数了。 2. 菌落计数应该是所有菌落均做统计，如果你觉得通过浇注法内部与表面有干扰，可考虑通过涂布的方法计数。计数时不是平板上长多少就计多少的，菌液浓度越大，几个细胞长出一个菌落，或者甚至菌落连成菌苔，根本没法计数，即使数出来也不准确，我们通常对于一个样品会选择几个不同的稀释度，涂平板以后，选择生长菌落数在30-200左右的平板计数，然后再乘以稀释倍数得到原始样品的浓度，菌落数太多计数值偏小，菌落数太少随机性太大，很不准确。 3、你讨论浓度和OD值关系的时应选择一定范围，不是从0开始，大概10的5次方到8次方左右吧，浓度低的话OD值肯定趋近与0的，浓度太高的话两者关系不再近乎线性。。 |
6楼2013-04-29 19:01:16
bingge880306
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