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RT-PCR、western blot检测所需细胞数及细胞培养板的选择已有1人参与
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本人要做原代细胞的培养，一种干细胞，貌似比较难养，目前只查到其在培养板中培养成功的文献，而且存活时间也不长，7-10天左右，数目也不多，就5-10个克隆，每个克隆细胞在20-40左右。 本人的实验室，做了细胞培养后想检测细胞内的几种蛋白的表达及其mRNA的情况，需要RT-PCR、western blot，但怕细胞数量不够，不知道做这2种检测的话，至少需要多少细胞数呢？？ 再者，各种不同的细胞培养板、培养皿、培养瓶的区别是什么，请指教！！！ 我知道的一点就是，不同的细胞培养板、培养皿、培养瓶，细胞长满后所得细胞数目不一样。但是他们的使用用途来说有什么不同呢？ 我这个实验是在不同的体外干预下检测干细胞的增殖情况，如果数目够的话还想测mRNA和蛋白，这样的话用哪种培养器皿比较好呢？ 非常感谢！！！ |
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【答案】应助回帖
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lijh1234(缩++影代发): 金币+3, 鼓励应助 2013-04-16 20:54:47
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| 培养板、培养皿以及培养瓶都可以用来培养细胞，本质上没有太大区别，关键是看你的实验目的，如果是做增殖实验，肯定是首选培养板，可以酶标仪读数。对于提取RNA或者蛋白，肯定是选择培养皿方便细胞收集。培养瓶比较适合传代培养。另外除了普通的培养器皿之外还有特殊涂层的，可以改善细胞贴壁生长状况，或者阻止细胞贴壁，根据不同的细胞以及实验要求选择。一般来说RT-PCR需要的细胞数目不用很多，100 0000对于提取RNA足够了，对于蛋白提取，最好是10cm培养皿长满。 |
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