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1楼2013-04-15 10:38:08

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Haibara_Ai

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-04-15 16:28:58

原核基于sigma70的启动子分这么几个区域
activator结合位点（例如pBAD pLux，这个位点也可以放inhibitor，如pLtet pLlac）
之后是-35区，pTac的是e coli的consensus序列 ttgaca（当然ttgact也可以 T7的pL就用的这个）
之后是-35到-10的spacer，这个区域可以放inhibitor，pTac在这里放了一个LacO1
-10区，pTac用得是consensus序列tataat（T7的pl是gatact）
-10之后到+10都可以放inhibitor，抑制效果不一（如pA1lacO1）当然LacI和TetR的调控可以由一个远端的结合位点加强

在+1之后不要乱放东西，如果你不准备对你原有的Nterminal tag进行修正，那么只要包含原始的rbs序列就可以了
ATG往上数6个nt附近的agga类序列，总共留20个-30个nt就很保险了。
如果你要自己换得话。那么请使用rbs calculator计算或者用其他的5‘utr insulator进行设计

不过我看你要做敲初，那么是想看基因功能了？那样我建议你从头设计自己的质粒，完全没必要用那些改

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2楼2013-04-15 11:02:18

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回头太难

银虫 (知名作家)

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2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-04-15 11:02:18
原核基于sigma70的启动子分这么几个区域
activator结合位点（例如pBAD pLux，这个位点也可以放inhibitor，如pLtet pLlac）
之后是-35区，pTac的是e coli的consensus序列 ttgaca（当然ttgact也可以 T7的pL就用的这 ...

高手~仰慕

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3楼2013-04-15 20:00:56

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bolysu

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4楼2013-04-15 22:05:38

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Haibara_Ai

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bolysu(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-29 14:23:52

从原贴你写的东西看，你应该先去看看关于e coli基因表达各部分构成的内容。往多克隆位点里放一个单独的启动子一点意义都没有。另外T7启动子和e coli的非常不同，保险起见，我宁可重新构建个质粒，大概连可能出的小问题算在内也就两周工作量。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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5楼2013-04-16 00:26:06

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