24小时热门版块排行榜    

查看: 2157  |  回复: 11

bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-04-15 16:28:58
原核基于sigma70的启动子分这么几个区域
activator结合位点(例如pBAD pLux,这个位点也可以放inhibitor,如pLtet  pLlac)
之后是-35区,pTac的是e coli的consensus序列 ttgaca(当然ttgact也可以 T7的pL就用的这个)
之后是-35到-10的spacer,这个区域可以放inhibitor,pTac在这里放了一个LacO1
-10区,pTac用得是consensus序列tataat(T7的pl是gatact)
-10之后到+10都可以放inhibitor,抑制效果不一(如pA1lacO1)  当然LacI和TetR的调控可以由一个远端的结合位点加强

在+1之后不要乱放东西,如果你不准备对你原有的Nterminal tag进行修正,那么只要包含原始的rbs序列就可以了
ATG往上数6个nt附近的agga类序列,总共留20个-30个nt就很保险了。
如果你要自己换得话。那么请使用rbs calculator计算或者用其他的5‘utr insulator进行设计

不过我看你要做敲初,那么是想看基因功能了?那样我建议你从头设计自己的质粒,完全没必要用那些改
2楼2013-04-15 11:02:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

回头太难

银虫 (知名作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-04-15 11:02:18
原核基于sigma70的启动子分这么几个区域
activator结合位点(例如pBAD pLux,这个位点也可以放inhibitor,如pLtet  pLlac)
之后是-35区,pTac的是e coli的consensus序列 ttgaca(当然ttgact也可以 T7的pL就用的这 ...

高手~仰慕
3楼2013-04-15 20:00:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

4楼2013-04-15 22:05:38
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

★ ★
bolysu(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-29 14:23:52
从原贴你写的东西看,你应该先去看看关于e coli基因表达各部分构成的内容。往多克隆位点里放一个单独的启动子一点意义都没有。另外T7启动子和e coli的非常不同,保险起见,我宁可重新构建个质粒,大概连可能出的小问题算在内也就两周工作量。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-04-16 00:26:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

6楼2013-04-16 08:49:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

★ ★
bolysu(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-29 14:24:09
7楼2013-04-16 09:10:27
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

8楼2013-04-16 09:12:45
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuding6

木虫 (小有名气)

楼主:pACYCDuet-1启动子是T7启动子,为什么不能在普通大肠杆菌中表达?pET系列都是T7启动子吧,他们就可以在普通的大肠杆菌里表达啊。
9楼2013-04-16 16:05:25
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

10楼2013-04-16 16:56:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bolysu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
请填处理意见