24小时热门版块排行榜    

查看: 1950  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

回头太难

银虫 (知名作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-04-15 11:02:18
原核基于sigma70的启动子分这么几个区域
activator结合位点(例如pBAD pLux,这个位点也可以放inhibitor,如pLtet  pLlac)
之后是-35区,pTac的是e coli的consensus序列 ttgaca(当然ttgact也可以 T7的pL就用的这 ...

高手~仰慕
3楼2013-04-15 20:00:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-04-15 16:28:58
原核基于sigma70的启动子分这么几个区域
activator结合位点(例如pBAD pLux,这个位点也可以放inhibitor,如pLtet  pLlac)
之后是-35区,pTac的是e coli的consensus序列 ttgaca(当然ttgact也可以 T7的pL就用的这个)
之后是-35到-10的spacer,这个区域可以放inhibitor,pTac在这里放了一个LacO1
-10区,pTac用得是consensus序列tataat(T7的pl是gatact)
-10之后到+10都可以放inhibitor,抑制效果不一(如pA1lacO1)  当然LacI和TetR的调控可以由一个远端的结合位点加强

在+1之后不要乱放东西,如果你不准备对你原有的Nterminal tag进行修正,那么只要包含原始的rbs序列就可以了
ATG往上数6个nt附近的agga类序列,总共留20个-30个nt就很保险了。
如果你要自己换得话。那么请使用rbs calculator计算或者用其他的5‘utr insulator进行设计

不过我看你要做敲初,那么是想看基因功能了?那样我建议你从头设计自己的质粒,完全没必要用那些改
2楼2013-04-15 11:02:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

★ ★
bolysu(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-29 14:23:52
从原贴你写的东西看,你应该先去看看关于e coli基因表达各部分构成的内容。往多克隆位点里放一个单独的启动子一点意义都没有。另外T7启动子和e coli的非常不同,保险起见,我宁可重新构建个质粒,大概连可能出的小问题算在内也就两周工作量。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-04-16 00:26:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

6楼2013-04-16 08:49:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 7/350 2026-03-24 11:23 by 种大树
[考研] 08工学调剂 +7 用户573181 2026-03-20 12/600 2026-03-24 11:17 by 用户573181
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考研] 一志愿华东理工大学081700,初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 材料专硕找调剂 +3 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:13 by peike
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +4 谷雨上岸 2026-03-23 5/250 2026-03-23 21:18 by 不惑可乐
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 305分求调剂(食品工程) +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300(化学)304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见