24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1968  |  回复: 11

bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-04-15 16:28:58
原核基于sigma70的启动子分这么几个区域
activator结合位点(例如pBAD pLux,这个位点也可以放inhibitor,如pLtet  pLlac)
之后是-35区,pTac的是e coli的consensus序列 ttgaca(当然ttgact也可以 T7的pL就用的这个)
之后是-35到-10的spacer,这个区域可以放inhibitor,pTac在这里放了一个LacO1
-10区,pTac用得是consensus序列tataat(T7的pl是gatact)
-10之后到+10都可以放inhibitor,抑制效果不一(如pA1lacO1)  当然LacI和TetR的调控可以由一个远端的结合位点加强

在+1之后不要乱放东西,如果你不准备对你原有的Nterminal tag进行修正,那么只要包含原始的rbs序列就可以了
ATG往上数6个nt附近的agga类序列,总共留20个-30个nt就很保险了。
如果你要自己换得话。那么请使用rbs calculator计算或者用其他的5‘utr insulator进行设计

不过我看你要做敲初,那么是想看基因功能了?那样我建议你从头设计自己的质粒,完全没必要用那些改
2楼2013-04-15 11:02:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

回头太难

银虫 (知名作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-04-15 11:02:18
原核基于sigma70的启动子分这么几个区域
activator结合位点(例如pBAD pLux,这个位点也可以放inhibitor,如pLtet  pLlac)
之后是-35区,pTac的是e coli的consensus序列 ttgaca(当然ttgact也可以 T7的pL就用的这 ...

高手~仰慕
3楼2013-04-15 20:00:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

4楼2013-04-15 22:05:38
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

★ ★
bolysu(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-29 14:23:52
从原贴你写的东西看,你应该先去看看关于e coli基因表达各部分构成的内容。往多克隆位点里放一个单独的启动子一点意义都没有。另外T7启动子和e coli的非常不同,保险起见,我宁可重新构建个质粒,大概连可能出的小问题算在内也就两周工作量。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-04-16 00:26:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

6楼2013-04-16 08:49:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

★ ★
bolysu(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-29 14:24:09
7楼2013-04-16 09:10:27
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

8楼2013-04-16 09:12:45
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuding6

木虫 (小有名气)

楼主:pACYCDuet-1启动子是T7启动子,为什么不能在普通大肠杆菌中表达?pET系列都是T7启动子吧,他们就可以在普通的大肠杆菌里表达啊。
9楼2013-04-16 16:05:25
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

10楼2013-04-16 16:56:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bolysu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +3 @taotao 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:50 by wxiongid
[考研] 342求调剂 +3 加油a李zs 2026-03-26 3/150 2026-03-27 00:29 by wxiongid
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 化学308分求调剂 +5 你好明天你好 2026-03-23 5/250 2026-03-26 23:43 by 催化大白
[考研] 一志愿北化求调剂 +3 Jsman 2026-03-22 3/150 2026-03-26 21:06 by ajpv风雷
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 312求调剂 +8 上岸吧ZJY 2026-03-22 12/600 2026-03-26 18:49 by muchong357
[考研] 085600材料与化工306 +7 z1z2z3879 2026-03-21 7/350 2026-03-26 17:59 by fmesaito
[考研] 材料277求调剂 +5 min3 2026-03-24 5/250 2026-03-26 15:13 by zzll406
[考研] 308求调剂 +5 墨墨漠 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:19 by 544594351
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 求调剂 +6 研研,接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 305分求调剂(食品工程) +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见