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新虫 (初入文坛)

[求助] 这个pcr图片可以说明什么？应在哪方面改进？

各位老师，学长学姐们你们好：
   我是个pcr新手，以下是我的pcr图片，你们能帮我看看是哪出问题了吗？我只有15个金币，都给你们了。
这个是rna，图片1；这个是pcr的，图片2；谢谢。
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1楼 2013-04-14 17:28:40
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ptzhyding06

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-14 21:01:02
amisking: 回帖置顶 2013-04-14 21:01:05
RNA跑出来应该是3条带 三种RNA 隐约可以看到前面的两条但是不够明亮  貌似提的RNA质量不是很好 不过可以试试提胶浓度调整电泳时间把曝光强度的再调整的低点 可能会有好一点的效果
PCR的话貌似没有看到明显的条带，貌似是没有扩增出来或者是DNA量太低照的不明显，试试稍微降低一点退火温度增加循环数再看看是不是会有好一点的结果
祝实验顺利
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2楼2013-04-14 18:51:34
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-23 14:32:52
你的意思是先提RNA，然后反转录，以cDNA为模板做PCR吗？如果是这样，你的RNA质量不怎么好，里面有很多杂质，没有明显的RNA带。RNA样品消化DNA了吗？PCR没P出来，不能确定是否是模板的问题，这种情况下，最好做一下正对照，1用同样的引物P基因组DNA，2用cDNA模板扩增其它基因（比方说house keeping基因）。
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3楼2013-04-15 00:41:41
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aqp2

新虫 (初入文坛)
我回去试试
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4楼2013-04-15 18:05:23
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2013-04-18 21:07:22
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aqp2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ptzhyding06 at 2013-04-14 18:51:34
RNA跑出来应该是3条带 三种RNA 隐约可以看到前面的两条但是不够明亮  貌似提的RNA质量不是很好 不过可以试试提胶浓度调整电泳时间把曝光强度的再调整的低点 可能会有好一点的效果
PCR的话貌似没有看到明显的条带， ...

我对退火温度进行了梯度试验，我的目标条带退火温度为57.8度，我设的梯度为50 55 60,25微升体系，30个循环，结果和上面的一样。
麻烦问下，总rna在做反转录时加样量是怎样计算的？谢谢
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6楼2013-04-21 18:35:19
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ptzhyding06

铜虫 (初入文坛)
★
aqp2(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 01:49:58
引用回帖:
6楼: Originally posted by aqp2 at 2013-04-21 18:35:19
我对退火温度进行了梯度试验，我的目标条带退火温度为57.8度，我设的梯度为50 55 60,25微升体系，30个循环，结果和上面的一样。
麻烦问下，总rna在做反转录时加样量是怎样计算的？谢谢...

那个浓度是按试剂盒的说明来加的 测定的时候是用的Enpendof的蛋白核酸检测仪
一般在提取RNA后都会检验一下RNA A260/A280的比值吧
如果PCR条件确实没有问题话，是不是可以再确认一下引物这块有没有问题或者多加点cDNA
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7楼2013-04-23 09:43:35
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aqp2

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
请问楼主rt产物能不能通过跑胶看看确定下rt成功否
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8楼2013-05-02 21:04:02
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