| 查看: 2537 | 回复: 15 | ||||
zhoujlhn铜虫 (初入文坛)
|
[求助]
猪粪中细菌总DNA的提取
|
|||
小弟最近在提取猪粪中细菌的总DNA，老板说要自己摸索方法，没有考虑过用试剂盒，但是怎么提都没有提出来，请教各位前辈，有谁做过这一块的，请你给小弟我支支招！先谢谢了！ 下面是我用的方法：样品的前处理： 称取0.3g粪样放入2ml离心管中，加入1.5mlPBS（ph8.0）溶液，旋涡振荡混匀，4℃，800rpm离心10min;吸上清液转入另一干净2ml离心管中，4℃， 1000rpm离心 10min;再将上清液转入另一干净 2ml离心管中，重复此步骤，直至离心后上清液有菌体浑浊感为止；最后将上清液4℃，13000rpm离心5分钟，弃上清，收集沉淀。将沉淀用适量丙酮洗涤，并转入到 1.5ml离心管中，旋涡振荡混匀， 4℃，13000rpm离心5分钟，弃上清。用丙酮洗涤两次后，收集沉淀自然干燥或吹干 细胞裂解及DNA抽提： 1、 经过前处理后的样品，加600μL TE，20μL溶菌酶 (100mg/ml)，轻轻颠倒混匀，于37℃放置 30min; 2、 加入15μL蛋白酶K，500μL裂解液，55℃温浴3-4h，每 20min轻轻颠倒混匀一次; 3、 然后加等体积的酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，轻轻混成乳浊液， 4℃，13000rpm离心10min，小心吸上相至空管中; 4、 再加等体积的氯仿/异戊醇(24:l)轻轻颠倒混匀，13000rpm离心 10min，小心吸上相至空管中;加等体积的异丙醇，-20℃沉淀过夜; 5、 将DNA样品取出，13000rpm离心20min，倒去异丙醇，用80%异丙醇洗涤一次，13000rpm离心 10min，弃上清，并将异丙醇吹干; 6、 将DNA溶于60μL TE，0.8%琼脂糖凝胶电泳检测，于-70℃保存. |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 总DNA提取 |
» 猜你喜欢
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有19人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有9人回复
-
能否申诉？
已经有5人回复
-
为什么到现在没收到通知？
已经有5人回复
-
有没有仍没收到信息的
已经有8人回复
-
面上意见出来了
已经有18人回复
-
找导师
已经有7人回复
-
29号明天会评吗
已经有3人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有11人回复
-
我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？
已经有11人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用CTAB法提取细菌基因组DNA时，为何离心效果不好
已经有4人回复
- 试剂盒提取细菌DNA后，跑胶检测有条带，但是PCR后却无扩增产物。
已经有10人回复
- 细菌总DNA电泳图谱分析
已经有16人回复
- 细菌基因组DNA电泳图谱
已经有6人回复
- 提取细菌DNA的时候用反复煮沸+冻融的方法可行吗？
已经有4人回复
- 血液中提取细菌DNA
已经有5人回复
- 环境样品地下水中细菌总DNA的提取方法
已经有23人回复
- 【求助/交流】细菌总DNA电泳弥散拖尾
已经有7人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA提取试剂盒
已经有10人回复
- 【求助/交流】提细菌DNA的同时有没有可能把动物组织DNA提出来呢
已经有10人回复
- 【求助/交流】酚、氯仿法提取细菌DNA的试剂配制问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
- 【求助/交流】关于细菌基因组DNA大小的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】在提取细菌DNA基因组做为PCR模板时，如何保证各个DNA模板的浓度相近
已经有6人回复
3楼2013-04-11 22:59:29
2楼2013-04-11 21:31:08
zhoujlhn
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 66.4
- 帖子: 41
- 在线: 15.9小时
- 虫号: 1927421
- 注册: 2012-08-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2013-04-12 09:17:53
zhoujlhn
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 66.4
- 帖子: 41
- 在线: 15.9小时
- 虫号: 1927421
- 注册: 2012-08-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
5楼2013-04-12 09:18:45
6楼2013-04-12 10:57:06
yaoyl0679
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1368.9
- 散金: 1025
- 红花: 1
- 帖子: 599
- 在线: 175小时
- 虫号: 263608
- 注册: 2006-07-02
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
7楼2013-04-12 16:50:57
8楼2013-04-12 17:22:00
9楼2013-04-12 21:27:02
likewind_z
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 929.7
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 298
- 在线: 58.9小时
- 虫号: 1333686
- 注册: 2011-06-29
- 专业: 微生物生理与生物化学
10楼2013-04-13 16:29:54
投票:
30