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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 猪粪中细菌总DNA的提取
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品用液氮研磨两到三遍后0.5g或者0.75g；
裂解液 最好含有20% sds
65℃或者55℃  一到两小时 就够了

后面的 酚氯仿抽提 基本都一样 最后一步沉淀  个人觉得用3体积无水乙醇沉淀的比较干净，但是这个量比异丙醇可能少点。
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11楼2013-04-14 16:21:55
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zhoujlhn

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yaoyl0679 at 2013-04-12 16:50:57
前面不要这么处理，只要用pBS洗涤，离心8000rpm，把上清去掉，留沉淀，洗三次后用沉淀提DNA，肯定提出来

谢谢，已经提出来了，PBS洗涤，再用丙酮洗涤。
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一个人的奋斗！！！
12楼2013-04-19 16:02:35
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zhoujlhn

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 547star at 2013-04-12 21:27:02
前阵子看了资料，推荐用全基因组扩增试剂盒，自己先搜索资料看看，然后没钱就参考着买各种试剂回来做，基本都有国产的。

谢谢你！我之前也查了些试剂盒，正准备用试剂盒的时候，居然出来了哈哈！
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一个人的奋斗！！！
13楼2013-04-19 16:03:26
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zhoujlhn

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by likewind_z at 2013-04-13 16:29:54
既然结果里提到RNA很多，为什么步骤里没有RNA酶的处理？

没有用RNA酶处理，现在才买到RNA酶
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一个人的奋斗！！！
14楼2013-04-19 16:04:10
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zhoujlhn

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 老夏853 at 2013-04-14 16:21:55
样品用液氮研磨两到三遍后0.5g或者0.75g；
裂解液 最好含有20% sds
65℃或者55℃  一到两小时 就够了

后面的 酚氯仿抽提 基本都一样 最后一步沉淀  个人觉得用3体积无水乙醇沉淀的比较干净，但是这个量比异丙醇 ...

谢谢你的建议，我现在已经提出来了，我的样品就是里面的杂质太多了抑制了酶的活性，主要是前期的处理
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一个人的奋斗！！！
15楼2013-04-19 16:06:02
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610241035

新虫 (初入文坛)
厉害的楼主：
           那个你最终的方法还是就最初的步骤吗？还是有所改进，我现在也要提一堆组织中的细菌的DNA，感觉跟你这个好像。。。。谢谢高人了。。。。
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16楼2014-03-10 22:28:58
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