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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样品用液氮研磨两到三遍后0.5g或者0.75g;
裂解液 最好含有20% sds
65℃或者55℃  一到两小时 就够了

后面的 酚氯仿抽提 基本都一样 最后一步沉淀  个人觉得用3体积无水乙醇沉淀的比较干净,但是这个量比异丙醇可能少点。
11楼2013-04-14 16:21:55
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zhoujlhn

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yaoyl0679 at 2013-04-12 16:50:57
前面不要这么处理,只要用pBS洗涤,离心8000rpm,把上清去掉,留沉淀,洗三次后用沉淀提DNA,肯定提出来

谢谢,已经提出来了,PBS洗涤,再用丙酮洗涤。
一个人的奋斗!!!
12楼2013-04-19 16:02:35
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zhoujlhn

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 547star at 2013-04-12 21:27:02
前阵子看了资料,推荐用全基因组扩增试剂盒,自己先搜索资料看看,然后没钱就参考着买各种试剂回来做,基本都有国产的。

谢谢你!我之前也查了些试剂盒,正准备用试剂盒的时候,居然出来了哈哈!
一个人的奋斗!!!
13楼2013-04-19 16:03:26
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zhoujlhn

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by likewind_z at 2013-04-13 16:29:54
既然结果里提到RNA很多,为什么步骤里没有RNA酶的处理?

没有用RNA酶处理,现在才买到RNA酶
一个人的奋斗!!!
14楼2013-04-19 16:04:10
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zhoujlhn

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 老夏853 at 2013-04-14 16:21:55
样品用液氮研磨两到三遍后0.5g或者0.75g;
裂解液 最好含有20% sds
65℃或者55℃  一到两小时 就够了

后面的 酚氯仿抽提 基本都一样 最后一步沉淀  个人觉得用3体积无水乙醇沉淀的比较干净,但是这个量比异丙醇 ...

谢谢你的建议,我现在已经提出来了,我的样品就是里面的杂质太多了抑制了酶的活性,主要是前期的处理
一个人的奋斗!!!
15楼2013-04-19 16:06:02
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610241035

新虫 (初入文坛)

厉害的楼主:
           那个你最终的方法还是就最初的步骤吗?还是有所改进,我现在也要提一堆组织中的细菌的DNA,感觉跟你这个好像。。。。谢谢高人了。。。。
16楼2014-03-10 22:28:58
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