| 查看: 2180 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
zhoujlhn铜虫 (初入文坛)
|
[求助]
猪粪中细菌总DNA的提取
|
|
小弟最近在提取猪粪中细菌的总DNA，老板说要自己摸索方法，没有考虑过用试剂盒，但是怎么提都没有提出来，请教各位前辈，有谁做过这一块的，请你给小弟我支支招！先谢谢了！ 下面是我用的方法：样品的前处理： 称取0.3g粪样放入2ml离心管中，加入1.5mlPBS（ph8.0）溶液，旋涡振荡混匀，4℃，800rpm离心10min;吸上清液转入另一干净2ml离心管中，4℃， 1000rpm离心 10min;再将上清液转入另一干净 2ml离心管中，重复此步骤，直至离心后上清液有菌体浑浊感为止；最后将上清液4℃，13000rpm离心5分钟，弃上清，收集沉淀。将沉淀用适量丙酮洗涤，并转入到 1.5ml离心管中，旋涡振荡混匀， 4℃，13000rpm离心5分钟，弃上清。用丙酮洗涤两次后，收集沉淀自然干燥或吹干 细胞裂解及DNA抽提： 1、 经过前处理后的样品，加600μL TE，20μL溶菌酶 (100mg/ml)，轻轻颠倒混匀，于37℃放置 30min; 2、 加入15μL蛋白酶K，500μL裂解液，55℃温浴3-4h，每 20min轻轻颠倒混匀一次; 3、 然后加等体积的酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，轻轻混成乳浊液， 4℃，13000rpm离心10min，小心吸上相至空管中; 4、 再加等体积的氯仿/异戊醇(24:l)轻轻颠倒混匀，13000rpm离心 10min，小心吸上相至空管中;加等体积的异丙醇，-20℃沉淀过夜; 5、 将DNA样品取出，13000rpm离心20min，倒去异丙醇，用80%异丙醇洗涤一次，13000rpm离心 10min，弃上清，并将异丙醇吹干; 6、 将DNA溶于60μL TE，0.8%琼脂糖凝胶电泳检测，于-70℃保存. |
回复此楼» 猜你喜欢
AI 太可怕了，写基金时，提出想法，直接生成的文字比自己想得深远，还有科学性
已经有9人回复
-
依托企业入选了国家启明计划青年人才。有无高校可以引进的。
已经有11人回复
-
依托企业入选了国家启明计划青年人才。有无高校可以引进的。
已经有10人回复
-
同年申请2项不同项目，第1个项目里不写第2个项目的信息，可以吗
已经有9人回复
-
表哥与省会女结婚，父母去帮带孩子被省会女气回家生重病了
已经有7人回复
-
天津大学招2026.09的博士生，欢迎大家推荐交流（博导是本人）
已经有9人回复
-
有院领导为了换新车，用横向课题经费买了俩车
已经有10人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
16楼2014-03-10 22:28:58
2楼2013-04-11 21:31:08
3楼2013-04-11 22:59:29
zhoujlhn
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 66.4
- 帖子: 41
- 在线: 15.9小时
- 虫号: 1927421
- 注册: 2012-08-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2013-04-12 09:17:53