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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手做的PCR-SSCP，求大神指点啊
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主

[求助] 新手做的PCR-SSCP，求大神指点啊

为什么胶染色之后全黑了，一点透明度都没有了啊，谁能告诉我是什么原因吗？我以前只染过DGGE的胶，但是都不会染成这样子

IMG_2501.JPG
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1楼 2013-04-10 15:21:12
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主
引用回帖:
13楼: Originally posted by Eileenliao at 2013-04-15 18:46:23
哦，这样，楼主跑SSCP用什么染色呢，我用的是银染，觉得染色挺麻烦的...

我已经找到原因啦，嘿嘿
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14楼2013-04-15 21:36:57
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普通回帖

leisure797

铁杆木虫 (职业作家)

百里登风

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励积极交流经验 2013-04-10 16:48:18
你这是没有实际操作好，关注一下试验原理，自行检查
为了便于观察分析结果，PCR扩增体系中常加入a-32P dNTP标记PCR产物，电泳后放射自显影观察泳动带的位置。目前也常用银染法来染色聚丙烯酰胺凝胶上的DNA泳动带，此方法可避免同位素的污染及对操作者的辐射损伤，但其灵敏度不如用同位素标记。
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笑一个！
2楼2013-04-10 15:39:19
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主
引用回帖:
2楼: Originally posted by leisure797 at 2013-04-10 15:39:19
你这是没有实际操作好，关注一下试验原理，自行检查
为了便于观察分析结果，PCR扩增体系中常加入a-32P dNTP标记PCR产物，电泳后放射自显影观察泳动带的位置。目前也常用银染法来染色聚丙烯酰胺凝胶上的DNA泳动带， ...

你是来赚金币的啊，我要是知道，我就不问了
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3楼2013-04-10 17:04:15
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genolab

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你最后显影的时候肯定是碱量太多了，导致整个胶都是黑色的了。
你要检查一下你的染色的盒子是否清洗干净，在什么地方有可能碰到碱溶液或碱的残留。
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4楼2013-04-10 17:57:43
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genolab

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

补充一下，显影的盒子里如果也含有大量的碱液，肯定会一下子就变黑的。
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5楼2013-04-10 17:58:25
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by genolab at 2013-04-10 17:58:25
补充一下，显影的盒子里如果也含有大量的碱液，肯定会一下子就变黑的。

我都是洗干净的啊，而且显色的时候不是就要加氢氧化钠吗？
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6楼2013-04-10 19:48:09
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用量会不会出问题了？
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7楼2013-04-11 11:37:55
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主
引用回帖:
7楼: Originally posted by xiadongliang at 2013-04-11 11:37:55
用量会不会出问题了？

比如说什么用量啊？
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8楼2013-04-11 12:57:19
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
主要就是NaOH
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9楼2013-04-11 13:24:03
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主
1.6%多吗？不多吧
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10楼2013-04-11 15:38:58
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