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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

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[求助] 新手做的PCR-SSCP,求大神指点啊

为什么胶染色之后全黑了,一点透明度都没有了啊,谁能告诉我是什么原因吗?我以前只染过DGGE的胶,但是都不会染成这样子

IMG_2501.JPG
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

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2楼: Originally posted by leisure797 at 2013-04-10 15:39:19
你这是没有实际操作好,关注一下试验原理,自行检查
为了便于观察分析结果,PCR扩增体系中常加入a-32P dNTP标记PCR产物,电泳后放射自显影观察泳动带的位置。目前也常用银染法来染色聚丙烯酰胺凝胶上的DNA泳动带, ...

你是来赚金币的啊,我要是知道,我就不问了
3楼2013-04-10 17:04:15
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堍仔

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5楼: Originally posted by genolab at 2013-04-10 17:58:25
补充一下,显影的盒子里如果也含有大量的碱液,肯定会一下子就变黑的。

我都是洗干净的啊,而且显色的时候不是就要加氢氧化钠吗?
6楼2013-04-10 19:48:09
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堍仔

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7楼: Originally posted by xiadongliang at 2013-04-11 11:37:55
用量会不会出问题了?

比如说什么用量啊?
8楼2013-04-11 12:57:19
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

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1.6%多吗?不多吧
10楼2013-04-11 15:38:58
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堍仔

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11楼: Originally posted by Eileenliao at 2013-04-12 14:49:37
恩,我有一次做DGGE染胶成这样,当时我的问题是因为我跑胶的温度没有达到60°,我不知道楼主的SSCP跑胶操作是否要一定的温度

啊?他们说要4到16度,这几天晚上温度应该差不多的啊,我也不太懂,可能什么试剂配错了,我昨天跑了的染色就很好
12楼2013-04-13 14:32:44
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堍仔

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13楼: Originally posted by Eileenliao at 2013-04-15 18:46:23
哦,这样,楼主跑SSCP用什么染色呢,我用的是银染,觉得染色挺麻烦的...

我已经找到原因啦,嘿嘿
14楼2013-04-15 21:36:57
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堍仔

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15楼: Originally posted by Eileenliao at 2013-04-18 20:07:06
是什么原因呢?...

硝酸银加多了
16楼2013-04-18 20:42:47
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