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weiyuqiao木虫 (初入文坛)
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[求助]
感受态的制备
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| 如果我想做基因的过表达，目的片段与载体连接好想导入工程菌，那么这个工程菌是不是应该先做成感受态，求醋酸菌（巴氏醋杆菌和木醋杆菌）的感受态细胞制作方法，如果有相关文献就更好了。实验新手，请大家多多帮助！谢谢！ |
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【答案】应助回帖
★ ★
weiyuqiao: 金币+2, ★有帮助 2013-04-19 16:12:49
weiyuqiao: 金币+2, ★有帮助 2013-04-19 16:12:49
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感受态细胞可以分为：一般感受态细胞和超级感受态细胞，后者制备起来更复杂一点。我做的是一般大肠杆菌感受态细胞的制备，但感受态细胞制备的基本步骤应该都是差不多的。这是我的方法，你可以参考下： 1、菌株的活化培养，当OD600=0.6（对数期） 2、取10ml菌液加入无菌离心管中，冰浴10min 3、4℃，4000rpm，离心10min，弃上清 4、在冰浴上，向离心管中加入10ml 4℃预冷的0.1M CaCl2，充分混匀，冰浴30min 5、4℃，4000rpm，离心10min，弃上清 6、在冰浴上，向离心管中加入10ml 4℃预冷的0.1M CaCl2，充分混匀（动作要轻，不可剧烈混匀），冰浴30min 7、4℃，4000rpm，离心10min，弃上清 8、在冰浴上，向离心管中加入2ml 4℃预冷的0.1M CaCl2，充分混匀（动作要轻，不可剧烈混匀） 9、将制备好的感受态细胞分装于1.5ml 的EP管中，每管200ul。 上述感受态细胞可直接用于转化，若当天不用，可在其中加入甘油（终浓度为20%），于-70℃保存，可保存2年左右。 注：整个过程应该在无菌条件下进行； 其中0.1M CaCl2配制好后，要用0.45um滤膜过滤除菌 |
2楼2013-04-19 14:54:42