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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » 电镜样品前处理求助
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774310797

铜虫 (初入文坛)

[求助] 电镜样品前处理求助

做的是鱼肉，之前用2.5%的戊二醛固定。做电镜的老师说要把鱼肉切成芝麻粒大小，再放入戊二醛固定液中拿给他做。说用两个剃须刀片一左一右快速划过肉片就切下了，可是偶切不出啊，最大的肉块有2cm*1cm*1cm，切的时候只有一个刀片能划过，另一个划不过去，是不是肉太大了呀？可是把样品切薄了也是划不出啊。求助各位大侠？怎样才能切出芝麻粒大小的小鱼块嘞？
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1楼2013-04-07 11:11:13
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yzhongtian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
红舟流星: 金币+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-04-07 15:56:31
774310797: 金币+5, ★有帮助 2013-04-08 10:10:13
774310797(红舟流星代发): 金币+1, 代扣代发金币 2013-08-31 12:00:05
对于你所说的问题，就像前面有人回答过的，降低温度后进行切片，会切的又薄又整齐，并且对组织的破坏也较小，比如在液氮中操作，固定一端后用手术刀或者一次性剃须刀快速划下就行了。
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6楼2013-04-07 15:06:26
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红舟流星

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
fool_proof: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎常来生物材料版应助交流 2013-04-08 08:51:31
774310797: 金币+5, ★有帮助 2013-04-08 10:09:55
引用回帖:
9楼: Originally posted by 774310797 at 2013-04-07 18:48:07
谢谢！
我在冰箱里冷冻试了一下，刀切不下去。请教具体做法。...

放液氮里面5分钟，然后拿出来切，用尖锥钳固定另一端，具体可以参考火锅用的羊肉，看看他们怎么切得。
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红楼一梦终难寻扁舟载酒且慢行落花流水依惜别月伴明星照前路
10楼2013-04-07 21:57:26
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2013-04-11 14:28:56
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13楼2013-04-11 12:50:00
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774310797

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by suxsu at 2013-04-08 16:06:01
两个刀片中间夹几张纸片，直接划过试试

谢谢。长时间没来了，抱歉回复有点晚。你说的方法试过，不过这个对水果什么东西的有用，由于纤维太多，我那个鱼肉划不过去，一划下去，一片肉都撕扯下来，或者是划不过去。最后还是老老实实用刀片练习了两天，按老师那个方法划的。孰能生巧啊， 是我之前想偷懒了。多谢应助。
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15楼2013-04-17 16:03:44
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774310797

铜虫 (初入文坛)
多谢各位应助，最后还是按老师说的方法，老老实实练习了两天再划的鱼块，划出的鱼足够小。
我用的方法是，把固定的鱼块从外层开始切（用剃须刀片，一段用镊子等稍固定，另一端用刀片切），一层层切到只剩中间部分小块（注意不要破坏到要取的部分，忌用力挤压、忌划拉伤）。剩下小块后，按老师说那个方法就能划了，用两个刀片快速划过，留下最中间的小部分鱼。  因为我要观察的是纤维结构，所以划的时候要注意留纵切。
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17楼2013-04-17 16:11:57
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Jackcd12

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
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fool_proof: 金币+1, 欢迎常来生物材料版应助交流 2013-04-07 13:00:07
电镜观察对样品的形状没有那么多讲究的，片，粒状都可以的，关键是戊二醛交联固定细胞和其周围基质。你将戊二醛固定后的样品脱水干燥后，粘在一个金属板上就，他给你溅射一层Au，就看电镜了。
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Themoreamanlearns,themoreheknowshisignorance!
2楼2013-04-07 12:26:35
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774310797

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Jackcd12 at 2013-04-07 12:26:35
电镜观察对样品的形状没有那么多讲究的，片，粒状都可以的，关键是戊二醛交联固定细胞和其周围基质。你将戊二醛固定后的样品脱水干燥后，粘在一个金属板上就，他给你溅射一层Au，就看电镜了。

非常感谢您的回复。
不是形状的问题，是样块太大了，需要修小。修小后，再交由电镜老师进行梯度脱水、染色、观察等等。但是修整的过程中，用刀片划拉，容易拉坏组织纤维。请教要如何将样品修小而最小程度破坏组织。
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3楼2013-04-07 12:50:36
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红舟流星

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【答案】应助回帖

★
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黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2013-04-07 13:17:34
如果不怕低温的话，可以尝试降低温度，然后切片。
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4楼2013-04-07 13:11:03
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Jackcd12

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2013-04-07 19:09:43
774310797: 金币+5, ★有帮助 2013-04-08 10:10:24
774310797(红舟流星代发): 金币+1, 代扣代发金币 2013-08-31 12:00:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by 774310797 at 2013-04-07 12:50:36
非常感谢您的回复。
不是形状的问题，是样块太大了，需要修小。修小后，再交由电镜老师进行梯度脱水、染色、观察等等。但是修整的过程中，用刀片划拉，容易拉坏组织纤维。请教要如何将样品修小而最小程度破坏组织 ...

用手术刀，后刮胡刀片切，样品厚度在1-2mm都可以的，多练习一下，而且，在SME视频内，在你那么大的样品表面，总能找到一个满意的区域，不用太担心这个问题的。
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Themoreamanlearns,themoreheknowshisignorance!
5楼2013-04-07 14:46:36
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774310797

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Jackcd12 at 2013-04-07 14:46:36
用手术刀，后刮胡刀片切，样品厚度在1-2mm都可以的，多练习一下，而且，在SME视频内，在你那么大的样品表面，总能找到一个满意的区域，不用太担心这个问题的。...

谢谢！
固定的样品保存在4℃下，拿出至室温，一头用镊子轻按住，另一边用剃须刀片快速划两刀，取中间部分，这样可以吗？
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7楼2013-04-07 18:25:46
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774310797

铜虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by yzhongtian at 2013-04-07 15:06:26
对于你所说的问题，就像前面有人回答过的，降低温度后进行切片，会切的又薄又整齐，并且对组织的破坏也较小，比如在液氮中操作，固定一端后用手术刀或者一次性剃须刀快速划下就行了。

谢谢！
刚试了一下，把样品从固定液中取出，放在-20℃下冻两个小时，再拿出来迅速用剃须刀片划，可能是样品太厚、刀片不够锋利或者用力不对的原因，划不透。请问在常温下一端固定，一端快速划下行吗？会不会对组织结构有很大影响？
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8楼2013-04-07 18:29:50
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774310797

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 红舟流星 at 2013-04-07 13:11:03
如果不怕低温的话，可以尝试降低温度，然后切片。

谢谢！
我在冰箱里冷冻试了一下，刀切不下去。请教具体做法。
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9楼2013-04-07 18:48:07
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