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774310797

铜虫 (初入文坛)

[求助] 电镜样品前处理求助

做的是鱼肉，之前用2.5%的戊二醛固定。做电镜的老师说要把鱼肉切成芝麻粒大小，再放入戊二醛固定液中拿给他做。说用两个剃须刀片一左一右快速划过肉片就切下了，可是偶切不出啊，最大的肉块有2cm*1cm*1cm，切的时候只有一个刀片能划过，另一个划不过去，是不是肉太大了呀？可是把样品切薄了也是划不出啊。求助各位大侠？怎样才能切出芝麻粒大小的小鱼块嘞？
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1楼 2013-04-07 11:11:13
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774310797

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yzhongtian at 2013-04-07 15:06:26
对于你所说的问题，就像前面有人回答过的，降低温度后进行切片，会切的又薄又整齐，并且对组织的破坏也较小，比如在液氮中操作，固定一端后用手术刀或者一次性剃须刀快速划下就行了。

谢谢！
刚试了一下，把样品从固定液中取出，放在-20℃下冻两个小时，再拿出来迅速用剃须刀片划，可能是样品太厚、刀片不够锋利或者用力不对的原因，划不透。请问在常温下一端固定，一端快速划下行吗？会不会对组织结构有很大影响？
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8楼2013-04-07 18:29:50
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Jackcd12

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fool_proof: 金币+1, 欢迎常来生物材料版应助交流 2013-04-07 13:00:07
电镜观察对样品的形状没有那么多讲究的，片，粒状都可以的，关键是戊二醛交联固定细胞和其周围基质。你将戊二醛固定后的样品脱水干燥后，粘在一个金属板上就，他给你溅射一层Au，就看电镜了。
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Themoreamanlearns,themoreheknowshisignorance!
2楼2013-04-07 12:26:35
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774310797

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Jackcd12 at 2013-04-07 12:26:35
电镜观察对样品的形状没有那么多讲究的，片，粒状都可以的，关键是戊二醛交联固定细胞和其周围基质。你将戊二醛固定后的样品脱水干燥后，粘在一个金属板上就，他给你溅射一层Au，就看电镜了。

非常感谢您的回复。
不是形状的问题，是样块太大了，需要修小。修小后，再交由电镜老师进行梯度脱水、染色、观察等等。但是修整的过程中，用刀片划拉，容易拉坏组织纤维。请教要如何将样品修小而最小程度破坏组织。
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3楼2013-04-07 12:50:36
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红舟流星

荣誉版主 (文坛精英)

志在成为千元户！

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2013-04-07 13:17:34
如果不怕低温的话，可以尝试降低温度，然后切片。
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红楼一梦终难寻扁舟载酒且慢行落花流水依惜别月伴明星照前路
4楼2013-04-07 13:11:03
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