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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 要用扫描电镜看酵母形态，谁知道样品处理过程？
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dingxy2010

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 要用扫描电镜看酵母形态，谁知道样品处理过程？

送到别的地方去做的，电镜型号是是S-4800，要求是样品固体粉状的
发酵液中的酵母怎样处理？离心-戊二醛固定再怎么办？？？？
谁知道详细的样品处理方法？
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1楼 2011-10-01 21:57:28
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bohr86

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wolfebst(金币+5): 鼓励新虫 2011-10-02 14:32:18
不会吧，把细胞做成粉末状的再观察啊？这样能观察到形态吗？我以前是直接用个圆形薄片加点菌液烘干固定做下环扫就能观察到很好的形态了～
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2楼2011-10-02 08:41:19
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hekouyanlei

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
scelab(金币+2): 谢谢回复 2011-10-03 23:47:24
直接将菌液涂在铜颗上，让后自然风干并且喷金即可用SEM了
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3楼2011-10-02 13:17:48
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COXEM

捐助贵宾 (正式写手)

北京驰奔仪器有限公司- G.M &


【答案】应助回帖

★ ★
scelab(金币+2): 谢谢回复。头像是个优盘么？ 2011-10-03 23:48:08
固定后，滤纸过滤后，乙醇梯度脱水后，临界点干燥或者冷冻干燥，
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4楼2011-10-03 22:32:05
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molecula

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhang8826857(金币+3): good，回复的很认真^_^ 2011-10-06 09:13:55
其实酵母的观察没有这么麻烦
首先，酵母细胞是菌体最大类型细胞之一
在普通的光学显微镜下，采用徕卡电脑链接式的光学显微镜完全可以拍摄出比较清晰的图片，除非你像拍摄其细胞表面的模型；
其实，即便是你要电镜观察，最重要的一点是控制菌体在单位空间内的分布密度，也就是说太密了，观察到的细胞未必好；因此在采用-戊二醛固定之前，要通过稀释和重复做样的方式，控制单位菌密度，然后再固定，送测。
-戊二醛固定之后，可以进行普通的压片处理，在压片周围采用点粘式把两个玻片粘合在一起。切记：不要用力压两个玻片。而且点粘式的方法是：用石蜡或者树胶点四个点，轻轻扣合两个玻片就可以了。这样简单的固定，方便到时候观察处理。


还有其他很多方法，这样的方法都是每个实验室自己摸索出来的。
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5楼2011-10-04 00:22:34
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yinhui1111

新虫 (初入文坛)
请问楼上两个玻片做成的压片是用来做扫描电镜还是透射电镜？扫描电镜扫的是表面啊，你这样做的话扫的就成了玻片了啊。。不懂，请回复，谢谢。
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6楼2012-09-04 10:09:12
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chengjg

木虫 (正式写手)
首先，用去离子水反复洗涤菌体，离心 脱去培养基盐分。然后稀释到适当浓度 用光学显微镜观测菌体在视野下不要聚集就行，下一步取稀释好的菌悬液第一滴到载玻片上（用质量好点的载玻片哦），然后直接低温冷冻干燥，看到水分蒸发完拿出来就行。然后就可以送给人家做电镜了 ，之后的喷金什么的人家电镜操作员做呢，自己做不了哈哈 加一步乙醇梯度脱水也可以
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7楼2012-09-05 18:50:20
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