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求指点 PCR结果分析
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sunzhengwang
铁虫
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[
求助
]
求指点 PCR结果分析
cDNA做成之后,加了引物做PCR结果出来了二条带,很奇怪;
怀疑是引物问题: 重新换新的,结果还是一样;
重复一次,结果一样,
难道是cDNA的问题? 各路神仙帮忙指点一下吧。
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一手生存,一手梦想
1楼
2013-04-01 15:01:46
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王者归来001
木虫
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【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
可以做一个梯度PCR,可以得到一个比较合适的退火温度
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坚持不懈,终会成功!
11楼
2013-04-03 23:19:35
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bingdong05
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sunzhengwang(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助!
2013-05-31 23:11:34
有目的条带出现即可,pcr出现非特异性条带很正常的,若消除非特异性条带可以适当提高退火温度
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2楼
2013-04-01 15:09:49
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牧歌ping
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专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助,节日愉快
2013-04-01 15:58:38
你扩增的目的基因是否含有内含子?若是有内含子,可能是你逆转前RNA中混杂的DNA没有除尽,所以扩增出现的两条带一条是由DNA为模板扩出,一条是由逆转后的cDNA扩出。若没有内含子,可能是你的引物设计时特异性不高与多个位点结合,或者是退火温度有点低出现了非特异性扩增。
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3楼
2013-04-01 15:37:15
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sunzhengwang
铁虫
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2楼
:
Originally posted by
bingdong05
at 2013-04-01 15:09:49
有目的条带出现即可,pcr出现非特异性条带很正常的,若消除非特异性条带可以适当提高退火温度
也有可能是引物二聚体啊
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一手生存,一手梦想
4楼
2013-04-02 10:11:48
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