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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 显微镜观测时怎样使微生物涂布均匀
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刘兵

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 显微镜观测时怎样使微生物涂布均匀

最近在作Live／dead staining 试验，染色 观测等步骤都没有问题，但是在观测时微生物涂布一直不是很均匀，盖玻片先接触的一侧微生物较多，另一侧分布较少。请问怎么解决这个问题，如果不能完全解决的话，图像分析时应该怎么统计数据？谢谢！本身不是微生物专业的，请业内人士指点。

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永远爱老婆！
1楼 2013-03-28 01:16:14
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
刘兵: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-03-28 10:55:39
你可以等涂布处接近半干的时候再盖载玻片，水多的时候盖的话，确实容易盖不均匀
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IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
2楼2013-03-28 08:47:38
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foolmonkey

新虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
刘兵: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-03-28 10:57:43
刘兵: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 谢谢！ 2013-03-29 22:25:00
zhangxingc: MicEPI+1, 最基础的操作，也是最容易让人疏忽的环节 2013-03-30 00:52:44
在载玻片上滴加一滴无菌水，用接种环挑菌使放入无菌水中，制成菌悬液，再用另一玻片与载玻片保持四十五度角从玻片的一头将菌液推至全玻片，使菌均匀布置玻片，但不能多次以免把菌给碾死。等玻片干后就可以观察啦。也可以用吸水纸在另一头吸，让其涂布均匀和吸干多余的无菌水。有些时候观察需要染色就用染料将其染色再观看。
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3楼2013-03-28 09:13:56
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gwj050214964

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
刘兵: 金币+1, ★有帮助 2013-03-28 10:57:24
zhangxingc: 金币+3, 鼓励新虫发帖应助，欢迎常到微生物版 2013-03-28 11:00:52
载玻片略倾斜，由翘起一头盖盖玻片呢？不过应该都不能特别均匀吧，你可以直接在质控玻片上做，它有画好的单位面积的格子，多做几个然后取平均吧。

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4楼2013-03-28 09:49:17
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gwj050214964

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

载玻片略倾斜，由翘起一头盖盖玻片呢？不过应该都不能特别均匀吧，你可以直接在质控玻片上做，它有画好的单位面积的格子，多做几个然后取平均吧。

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5楼2013-03-28 09:51:39
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gwj050214964

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

载玻片略倾斜，由翘起一头盖盖玻片呢？不过应该都不能特别均匀吧，你可以直接在质控玻片上做，它有画好的单位面积的格子，多做几个然后取平均吧。

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6楼2013-03-28 09:51:47
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刘兵

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangxingc at 2013-03-28 08:47:38
你可以等涂布处接近半干的时候再盖载玻片，水多的时候盖的话，确实容易盖不均匀

我每次只取8-10uL水样滴在载玻片上，请问什么是半干的状态呢？
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永远爱老婆！
7楼2013-03-28 11:03:37
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刘兵

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by foolmonkey at 2013-03-28 09:13:56
在载玻片上滴加一滴无菌水，用接种环挑菌使放入无菌水中，制成菌悬液，再用另一玻片与载玻片保持四十五度角从玻片的一头将菌液推至全玻片，使菌均匀布置玻片，但不能多次以免把菌给碾死。等玻片干后就可以观察啦。也 ...

我观测的活性污泥的细菌，本身就是 菌悬液了，我用超声波又进行均质化，然后上镜观测。“另一玻片与载玻片保持四十五度角从玻片的一头将菌液推至全玻片”会不会使每次制片观测的结果 误差很大呢？
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永远爱老婆！
8楼2013-03-28 11:07:52
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刘兵

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gwj050214964 at 2013-03-28 09:49:17
载玻片略倾斜，由翘起一头盖盖玻片呢？不过应该都不能特别均匀吧，你可以直接在质控玻片上做，它有画好的单位面积的格子，多做几个然后取平均吧。

如果涂布不均匀的话，统计时误差会很大。如果实验误差定在5%的话，如果涂布不均的话，那这5% 就全靠运气了。
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永远爱老婆！
9楼2013-03-28 11:10:48
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 刘兵 at 2013-03-28 11:03:37
我每次只取8-10uL水样滴在载玻片上，请问什么是半干的状态呢？...

不能流动即可
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IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
10楼2013-03-28 11:11:41
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