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jiaojiao2479

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因重组突变

求助，我是一个新手   想把细菌的一段特定基因通过基因重组突变掉，而且要好筛选，怎么做啊？？？谢谢高人指点
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1楼 2013-03-25 10:40:16
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhangxingc: 金币+2, 鼓励新虫积极发帖交流，欢迎常到微生物版 2013-03-26 08:47:07
基因敲除不就突变了吗......
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益学善用
2楼2013-03-25 12:53:32
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jiaojiao2479

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tianchi2952 at 2013-03-25 12:53:32
基因敲除不就突变了吗......

嗯嗯，就是这个，但是什么引物，突变片段，还有用到的酶等  一些具体的步骤和原理，谢谢知道
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3楼2013-03-25 15:12:37
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个不是一般实验室能做的，基因敲除一般用于靶向定点变异，成本较高.....慎重考虑......程序有点复杂，如果只是想破坏这个基因不让其表达的话还有其他的办法，紫外诱变筛选也可以，成本较低，便于操作，只是有时候要靠运气，诱变育种不是每次都能成功的.......祝你好运！
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益学善用
4楼2013-03-26 13:24:49
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foolmonkey

新虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
紫外线诱变，辐射诱变，微重力诱变。
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5楼2013-03-26 18:15:20
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鱼鸢

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个有专门的质粒可用于基因组上DNA片段的替换，但是貌似风险也大，看运气能不能筛到目标菌株。
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6楼2013-03-27 14:42:26
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jiaojiao2479

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tianchi2952 at 2013-03-26 13:24:49
这个不是一般实验室能做的，基因敲除一般用于靶向定点变异，成本较高.....慎重考虑......程序有点复杂，如果只是想破坏这个基因不让其表达的话还有其他的办法，紫外诱变筛选也可以，成本较低，便于操作，只是有时候 ...

就会想做基因敲除，我查了点文献，关于引物设计和载体构建什么的不太明白，有什么好的指点吗？
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7楼2013-03-29 22:36:31
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by jiaojiao2479 at 2013-03-29 22:36:31
就会想做基因敲除，我查了点文献，关于引物设计和载体构建什么的不太明白，有什么好的指点吗？...

我现在想知道的是你是想达到一个什么目的，是要让这个基因变异掉还是让其沉默不表达或者是构建新的表达基因，目的不同方法也不同，没必要去花大力气去做基因敲除，基因敲除需要一整套载体系统，没有载体系统是不能做的，不光是设计几条引物那么简单的，定点改变原始基因组中某个基因很复杂......
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益学善用
8楼2013-03-30 08:57:56
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