Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 1657  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zliaoyuan

新虫 (正式写手)

[求助] 请教组氨酸标记切除问题

请教大家一个问题,我用pET28a载体做表达,获得的酶进行酶学性质分析,投稿后一个审稿人说要对表达的酶进行6His切除,因为之前做没有碰到这样的问题,pET28a表达的酶怎么切除呢?我看上面也没有特别的位点啊。请大家帮忙指点一下。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kagamiya

新虫 (初入文坛)

我一直都用NdeI的酶切位点,所以从来没考虑过T7 tag的问题,请问一下T7 tag可以有什么用呢?做IP?Pull Down?还是蛋白提纯?
7楼2013-03-22 23:19:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zliaoyuan: 金币+5, 有帮助 2013-03-24 16:04:24
不是很懂,这个6his估计是指第6个氨基酸是组氨酸,可以考虑切在第6个氨基酸以后的位置,具体看你的序列了。
不过做这步之前,最好看点文献,为什么要切。不是所有的审稿人的意见都是对的,只要你有足够的理由,可以推翻的
2楼2013-03-19 08:26:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zliaoyuan

新虫 (正式写手)

他的意思就是6个组氨酸标记可能会影响酶活,我检索了文献,做类似我这个功能的酶人家发表都没有切除,我测活性也没有看到有影响,本来想重做,但没有看到pET系列His标记切除的文献,所以不知道要用什么酶切,我也想过,用文献反驳,问题是这个审稿人也只是说可能会影响,他认为切除后更能真实的反映这个酶的催化活性。所以不知道怎么反驳好。
3楼2013-03-19 09:03:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjuakasa

木虫 (著名写手)

神木王虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, 非常正确 2013-03-20 08:10:40
一方面引用文献反驳,还有你不是测了酶活吗?没有影响,这不就是最好的反驳意见吗?
没有影响干嘛要切除?或者留着对后续提纯,回收还有用处呢。
这个六组氨酸标签,一般用凝血酶切除,但是也还会残留一两个残基,而且凭空加了一步纯化(凝血酶要去掉)
何必呢?
如切如磋,如琢如磨
4楼2013-03-19 17:12:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求助调剂,跨调 +18 X十甫寸Y 2026-04-11 19/950 2026-04-14 19:26 by Art1977
[考研] 复试调剂 +18 积极向上; 2026-04-10 20/1000 2026-04-14 16:11 by zs92450
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 297工科,求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 生物学调剂,一志愿西南大学348,Top期刊一区二作、二区三作,三等奖学金三次 +5 candyyyi 2026-04-09 5/250 2026-04-13 09:02 by 可淡不可忘
[考研] 314求调剂 +24 wakeluofu 2026-04-09 25/1250 2026-04-13 08:58 by lhj2009
[考研] 296求调剂 +14 汪!?! 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-09 12/600 2026-04-12 10:32 by 逆水乘风
[考研] 0854调剂 +12 长弓傲 2026-04-09 13/650 2026-04-12 09:56 by 逆水乘风
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 一志愿西北工业大学289 085602 +33 yang婷 2026-04-10 34/1700 2026-04-12 08:11 by Art1977
[考研] 280求调剂 +7 兮兮夜夜 2026-04-09 10/500 2026-04-12 00:33 by 蓝云思雨
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 087100初试311求调剂 +4 任雅琴 2026-04-09 4/200 2026-04-11 10:33 by zhq0425
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +9 你让我怎么荔枝 2026-04-10 10/500 2026-04-11 08:33 by zhq0425
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 考研调剂 +26 硕星赴 2026-04-09 27/1350 2026-04-10 22:24 by 猪会飞
[考研] 材料化工总分334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 20:19 by maddjdld
[考研] 求机械专硕297第二批调剂 +5 拾柒12。 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:43 by 允当适度
信息提示
请填处理意见