24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1673  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zliaoyuan

新虫 (正式写手)

[求助] 请教组氨酸标记切除问题

请教大家一个问题,我用pET28a载体做表达,获得的酶进行酶学性质分析,投稿后一个审稿人说要对表达的酶进行6His切除,因为之前做没有碰到这样的问题,pET28a表达的酶怎么切除呢?我看上面也没有特别的位点啊。请大家帮忙指点一下。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zliaoyuan

新虫 (正式写手)

他的意思就是6个组氨酸标记可能会影响酶活,我检索了文献,做类似我这个功能的酶人家发表都没有切除,我测活性也没有看到有影响,本来想重做,但没有看到pET系列His标记切除的文献,所以不知道要用什么酶切,我也想过,用文献反驳,问题是这个审稿人也只是说可能会影响,他认为切除后更能真实的反映这个酶的催化活性。所以不知道怎么反驳好。
3楼2013-03-19 09:03:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zliaoyuan: 金币+5, 有帮助 2013-03-24 16:04:24
不是很懂,这个6his估计是指第6个氨基酸是组氨酸,可以考虑切在第6个氨基酸以后的位置,具体看你的序列了。
不过做这步之前,最好看点文献,为什么要切。不是所有的审稿人的意见都是对的,只要你有足够的理由,可以推翻的
2楼2013-03-19 08:26:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjuakasa

木虫 (著名写手)

神木王虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, 非常正确 2013-03-20 08:10:40
一方面引用文献反驳,还有你不是测了酶活吗?没有影响,这不就是最好的反驳意见吗?
没有影响干嘛要切除?或者留着对后续提纯,回收还有用处呢。
这个六组氨酸标签,一般用凝血酶切除,但是也还会残留一两个残基,而且凭空加了一步纯化(凝血酶要去掉)
何必呢?
如切如磋,如琢如磨
4楼2013-03-19 17:12:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-03-21 08:16:08
您有没有考虑过为何要除去6HIS呢?有时候去除不去除都可以,但有时候必须除去,比如一些人体多肽,名字就是以他的氨基酸个数来命名的,多一个氨基酸都不是这个多肽,虽然有时候多一个氨基酸对功能没有影响,但是免疫不一样。不知你的是属于什么情况。测活有没有影响是要求做对照的,拿没有HIS的做对照,才知道是否有影响。切除标签的话如楼上所说,不切的话,你就和编辑好好聊聊。编辑是国内的还是国外的啊,还是他学生审的稿啊?
5楼2013-03-20 11:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-11 13/650 2026-04-17 10:38 by cuisz
[考研] 291求调剂 +9 关忆北. 2026-04-14 9/450 2026-04-16 22:49 by cfdbai
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 307中医考研调剂 +6 于以采蘩 2026-04-14 6/300 2026-04-16 16:20 by qingfeng258
[考研] 求调剂 +11 小聂爱学习 2026-04-11 15/750 2026-04-15 21:57 by noqvsozv
[考研] 297,工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 调剂求收留 +34 果然有我 2026-04-10 35/1750 2026-04-15 13:05 by 西北望—风沙
[考研] 211本科材料化工求调剂 +19 YHLAH 2026-04-11 23/1150 2026-04-14 22:25 by fenglj492
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 食品与营养(0955)271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] 求调剂,一志愿材料科学与工程985,365分, +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 359求调剂 +5 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 19:55 by lbsjt
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 352 求调剂 +6 yzion 2026-04-11 8/400 2026-04-11 16:24 by 明月此时有
[考研] 求调剂 +3 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 14:13 by luhong1990
信息提示
请填处理意见