应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教组氨酸标记切除问题
51/1返回列表
查看: 1905  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zliaoyuan

新虫 (正式写手)

[求助] 请教组氨酸标记切除问题

请教大家一个问题，我用pET28a载体做表达，获得的酶进行酶学性质分析，投稿后一个审稿人说要对表达的酶进行6His切除，因为之前做没有碰到这样的问题，pET28a表达的酶怎么切除呢？我看上面也没有特别的位点啊。请大家帮忙指点一下。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-18 21:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zliaoyuan

新虫 (正式写手)
他的意思就是6个组氨酸标记可能会影响酶活，我检索了文献，做类似我这个功能的酶人家发表都没有切除，我测活性也没有看到有影响，本来想重做，但没有看到pET系列His标记切除的文献，所以不知道要用什么酶切，我也想过，用文献反驳，问题是这个审稿人也只是说可能会影响，他认为切除后更能真实的反映这个酶的催化活性。所以不知道怎么反驳好。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-19 09:03:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zliaoyuan: 金币+5, ★有帮助 2013-03-24 16:04:24
不是很懂，这个6his估计是指第6个氨基酸是组氨酸，可以考虑切在第6个氨基酸以后的位置，具体看你的序列了。
不过做这步之前，最好看点文献，为什么要切。不是所有的审稿人的意见都是对的，只要你有足够的理由，可以推翻的
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-19 08:26:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjuakasa

木虫 (著名写手)

神木王虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, 非常正确 2013-03-20 08:10:40
一方面引用文献反驳，还有你不是测了酶活吗？没有影响，这不就是最好的反驳意见吗？
没有影响干嘛要切除？或者留着对后续提纯，回收还有用处呢。
这个六组氨酸标签，一般用凝血酶切除，但是也还会残留一两个残基，而且凭空加了一步纯化（凝血酶要去掉）
何必呢？
赞一下 回复此楼
如切如磋，如琢如磨
4楼2013-03-19 17:12:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-03-21 08:16:08
您有没有考虑过为何要除去6HIS呢？有时候去除不去除都可以，但有时候必须除去，比如一些人体多肽，名字就是以他的氨基酸个数来命名的，多一个氨基酸都不是这个多肽，虽然有时候多一个氨基酸对功能没有影响，但是免疫不一样。不知你的是属于什么情况。测活有没有影响是要求做对照的，拿没有HIS的做对照，才知道是否有影响。切除标签的话如楼上所说，不切的话，你就和编辑好好聊聊。编辑是国内的还是国外的啊，还是他学生审的稿啊？
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-20 11:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 8/400 2026-10-12 18:09 by wangyl_123
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +5 Isak0320 2026-10-12 7/350 2026-10-12 18:03 by 有人要害朕
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭