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huanheihuan

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因敲除中SOE-PCR引物的设计及载体的构建

最近想做单增李斯特菌中某一个基因的敲除,在构建载体时想把目的基因的上游,下游连在载体上,并在上下游基因之间连一个抗生素抗性基因,以便筛选,SOE-PCR的引物怎么设计呀?还有这3个片段怎么连在一起啊,谢谢啦,我是新手啊,多谢了
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serena1205

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

分别p出三段再连接,可通过添加酶切位点将3段连接也可作重叠PCR,抗性基因扩增可先查找基因序列,再用primer5.0设计引物
2楼2013-03-17 14:42:10
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huanheihuan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by serena1205 at 2013-03-17 14:42:10
分别p出三段再连接,可通过添加酶切位点将3段连接也可作重叠PCR,抗性基因扩增可先查找基因序列,再用primer5.0设计引物

怎样设计重叠引物啊?谢谢,谢谢啦
3楼2013-03-18 09:02:20
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