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huanheihuan

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[求助] 基因敲除中SOE-PCR引物的设计及载体的构建

最近想做单增李斯特菌中某一个基因的敲除，在构建载体时想把目的基因的上游，下游连在载体上，并在上下游基因之间连一个抗生素抗性基因，以便筛选，SOE-PCR的引物怎么设计呀？还有这3个片段怎么连在一起啊，谢谢啦，我是新手啊，多谢了

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1楼 2013-03-14 14:32:01

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serena1205

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【答案】应助回帖

分别p出三段再连接，可通过添加酶切位点将3段连接也可作重叠PCR，抗性基因扩增可先查找基因序列，再用primer5.0设计引物

2楼2013-03-17 14:42:10

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huanheihuan

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2楼: Originally posted by serena1205 at 2013-03-17 14:42:10
分别p出三段再连接，可通过添加酶切位点将3段连接也可作重叠PCR，抗性基因扩增可先查找基因序列，再用primer5.0设计引物

怎样设计重叠引物啊？谢谢，谢谢啦

3楼2013-03-18 09:02:20

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