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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » MTT有关实验方法，请大家帮忙解决一下！！急！！！
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] MTT有关实验方法，请大家帮忙解决一下！！急！！！

最近做一种抗肿瘤蛋白对HepG2细胞的影响，我的蛋白是用无血清培养基溶解的，过滤除菌。每孔200ul，药物作用24小时后，发现没有作用，故打算做48，72小时的药物作用时间。我想向大家请教几个问题:
1,我的蛋白用无血清培养基溶解可不可以？因为考虑到血清的复杂性，故培养24小时的时候，全使用不含血清的培养基来培养，这样做可以吧？
2，我要是做药物孵育细胞48,72小时的时候，我该多长时间换一次培养基？？？24小时一换可以吗？？？因为我使用的是无血清培养基孵育细胞，如果长期不换的话，细胞就会死掉的，谢谢各位的解答！！
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1楼 2013-03-11 14:56:49
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
看来无高手啊~~
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2楼2013-03-12 21:32:42
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hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
長期沒血清的確會死，但短期沒血清會讓細胞停止生長，所我作的時候是使用2%血清，可保持細胞活性，這樣才能知道其它藥物對細胞有何影響，是毒害還是促進。但是起始種的細胞量要控制好，在最後收MTT時不要長太?M，不然會測不準，也因為沒長?M，所以就算3天，我也沒換培養基
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科研是無止盡的
3楼2013-03-12 22:15:58
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hy_sandra at 2013-03-12 22:15:58
長期沒血清的確會死，但短期沒血清會讓細胞停止生長，所我作的時候是使用2%血清，可保持細胞活性，這樣才能知道其它藥物對細胞有何影響，是毒害還是促進。但是起始種的細胞量要控制好，在最後收MTT時不要長太?M，不 ...

非常感谢！ 您想的和我差不多，我要是培养48,72小时的话，打算用1%的血清培养基（含有药物）来孵育细胞，您说2%也挺好的，非常感谢！
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4楼2013-03-13 12:32:28
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zhouhw

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我最近在做慢病毒转染的人脐带间充质干细胞，转染了以后做了MTT，可是每次结果都在0.2-0.3之间，已经做了三次了都这样，真不知道是怎么回事。请问有同学做过这个没？到底是哪出问题了
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5楼2013-03-16 11:07:23
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