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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] MTT有关实验方法,请大家帮忙解决一下!!急!!!

最近做一种抗肿瘤蛋白对HepG2细胞的影响,我的蛋白是用无血清培养基溶解的,过滤除菌。每孔200ul,药物作用24小时后,发现没有作用,故打算做48,72小时的药物作用时间。我想向大家请教几个问题:
1,我的蛋白用无血清培养基溶解可不可以?因为考虑到血清的复杂性,故培养24小时的时候,全使用不含血清的培养基来培养,这样做可以吧?
2,我要是做药物孵育细胞48,72小时的时候,我该多长时间换一次培养基???24小时一换可以吗???因为我使用的是无血清培养基孵育细胞,如果长期不换的话,细胞就会死掉的,谢谢各位的解答!!
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hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
長期沒血清的確會死,但短期沒血清會讓細胞停止生長,所我作的時候是使用2%血清,可保持細胞活性,這樣才能知道其它藥物對細胞有何影響,是毒害還是促進。但是起始種的細胞量要控制好,在最後收MTT時不要長太?M,不然會測不準,也因為沒長?M,所以就算3天,我也沒換培養基
科研是無止盡的
3楼2013-03-12 22:15:58
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hy_sandra at 2013-03-12 22:15:58
長期沒血清的確會死,但短期沒血清會讓細胞停止生長,所我作的時候是使用2%血清,可保持細胞活性,這樣才能知道其它藥物對細胞有何影響,是毒害還是促進。但是起始種的細胞量要控制好,在最後收MTT時不要長太?M,不 ...

非常感谢! 您想的和我差不多,我要是培养48,72小时的话,打算用1%的血清培养基(含有药物)来孵育细胞,您说2%也挺好的,非常感谢!
4楼2013-03-13 12:32:28
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zhouhw

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我最近在做慢病毒转染的人脐带间充质干细胞,转染了以后做了MTT,可是每次结果都在0.2-0.3之间,已经做了三次了都这样,真不知道是怎么回事。请问有同学做过这个没?到底是哪出问题了
5楼2013-03-16 11:07:23
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