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119904386

铁虫 (小有名气)

[求助] 溶于TE的菌液,多大转速离心能保证细菌在上清液里?

目的是要获得肠道内容物的菌群。我是这样操作的:
肠道内容物和剪开的肠壁,一并置于5ml TE中,震荡后取出600微升于EP管,然后加TE至1.5ml,1500转离心6min。取出上清液,再补加TE后离心,反复洗3次。最后13000转离心获得菌体沉淀。

问题是这样的,1500的转速我感觉很难离心出明显的分层,有几处肠道部位的样本甚至完全呈雾状,无法获得上清。现在想提高转速,又怕细菌沉淀下去。所以想咨询大家,用TE溶解的菌液,最高可达多少转速,可以保证细菌保存在上清液中而不沉淀?
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microblue

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你最后要多少菌?一点点还是要很多?
2楼2013-03-09 12:49:41
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119904386

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by microblue at 2013-03-09 12:49:41
你最后要多少菌?一点点还是要很多?

越多越好,后面还要抽提DNA,进行群体微生物的分析
3楼2013-03-09 13:13:26
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119904386

铁虫 (小有名气)

补充一下,后续的分子生物学实验对DNA的丰度和完整性要求都较高
4楼2013-03-09 13:45:32
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zqp9110

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助交流! 2013-03-11 14:23:22
119904386: 金币+20, 有帮助, 谢谢 2013-03-13 20:53:22
这个就是洗样了,速度不能太高啊,我们的做法是200g离心5min。
BEYOND
5楼2013-03-11 12:55:18
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