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crystalwby

铜虫 (小有名气)

[求助] 核酸蛋白测定仪怎么感觉测得就是不准呢

我是PAGE胶回收得到的一些DNA-buffer溶液,为了得到回收后的DNA浓度,我通过核酸蛋白测定仪来测定吸光度A,然后由朗伯比尔定律来进行计算。

回收后的DNA是溶解在100ulbuffer中的。
不同样品各取5ul用buffer稀释到100ul测得一组数据,每个样品都是测量3次取平均值。但是在测量过程中发现测得值有飘移情况,我有7个样品,其中6个的吸光度是小于0.1的。我后来查到说核酸蛋白测定仪在测得吸光度大于0.1时是准确的,于是我又重新取10ul回收液稀释到50ul去测。按道理来说,第二次得到的值应该是第一次的4倍才符合我稀释的浓度关系,但是大部分情况都不是这样。

比如:
0.047----0.063
0.085----0.222
0.121----0.319
0.045----0.085
0.047----0.089
0.083----0.153

这种结果让我很郁闷,而且之前采用5ul稀释到100ul时我测过几次,每次结果都相差挺大的。
如果0.222/0.319/0.153这种结果是准确的,那考虑到10ul稀释到50ul的稀释倍数,我计算得到的浓度那也太低了吧,不合常理啊。。。

这是仪器的问题吗?有没有办法避免呢。。。?

PS.  空白blank是我用的buffer,比色皿里面没有气泡,溶液混匀了

[ Last edited by crystalwby on 2013-3-7 at 11:09 ]
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