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crystalwby铜虫 (小有名气)
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[求助]
核酸蛋白测定仪怎么感觉测得就是不准呢
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我是PAGE胶回收得到的一些DNA-buffer溶液，为了得到回收后的DNA浓度，我通过核酸蛋白测定仪来测定吸光度A，然后由朗伯比尔定律来进行计算。 回收后的DNA是溶解在100ulbuffer中的。 不同样品各取5ul用buffer稀释到100ul测得一组数据，每个样品都是测量3次取平均值。但是在测量过程中发现测得值有飘移情况，我有7个样品，其中6个的吸光度是小于0.1的。我后来查到说核酸蛋白测定仪在测得吸光度大于0.1时是准确的，于是我又重新取10ul回收液稀释到50ul去测。按道理来说，第二次得到的值应该是第一次的4倍才符合我稀释的浓度关系，但是大部分情况都不是这样。 比如： 0.047----0.063 0.085----0.222 0.121----0.319 0.045----0.085 0.047----0.089 0.083----0.153 这种结果让我很郁闷，而且之前采用5ul稀释到100ul时我测过几次，每次结果都相差挺大的。 如果0.222/0.319/0.153这种结果是准确的，那考虑到10ul稀释到50ul的稀释倍数，我计算得到的浓度那也太低了吧，不合常理啊。。。 这是仪器的问题吗？有没有办法避免呢。。。？ PS. 空白blank是我用的buffer，比色皿里面没有气泡，溶液混匀了 [ Last edited by crystalwby on 2013-3-7 at 11:09 ] |
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