24小时热门版块排行榜    

查看: 2098  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cathereen_li

新虫 (初入文坛)

[求助] 我要扩3kb的片段,人的GLDC基因,总是扩不出来,求大侠指点呀 已有2人参与

我要扩增3kb的片段,人的GLDC基因的cDNA,总是扩不出来,求大侠指点呀!!试过了各种办法,两步法也试过了,一开始用pfu酶,后来用taq酶,LA taq也用过了,都P不出来,用taqP出来了一个,但是大小不对。我的体系为25微升体系,程序与体系如下:94度,3分钟;94度,45秒,55度,40秒,72度3分半,30个循环;72度8分钟。体系:上下游引物各一微升,模板视浓度而定,一般为2到5微升,buffer为2.5微升,dNTP为1.5微升,酶为1微升,补水到25微升。小女子论坛新手,金币不太足,还请各位大侠多多包涵~~~~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cathereen_li

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2013-03-04 15:51:35
你提的RNA质量如何?反转录酶质量怎么样,能否扩增3kb的片段

谢谢您的回复!想向您请教,该如何判断RNA质量?反转录试剂用的是北京全式金的的第一条链反转录试剂盒,能否扩增3kb的片段与反转录酶有着什么样的关系?
7楼2013-03-06 21:03:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

biosci

捐助贵宾 (知名作家)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流! 2013-03-04 22:22:15
你提的RNA质量如何?反转录酶质量怎么样,能否扩增3kb的片段
2楼2013-03-04 15:51:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱逍遥

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
检测cDNA的质量如何,如果不行重新合成模板
3楼2013-03-04 16:10:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haitian0625

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-04 22:22:07
刚用过pfu扩4kb,拙见:95度 5-10min; 95度 30'', 退火温度 30''-60'', 68度延伸 70''/80'', 35-40循环;68度 延伸6-8min. 引物浓度在10p即可。
4楼2013-03-04 21:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +18 Lanmanbaby 2026-08-09 30/1500 2026-08-12 09:10 by xandria
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见