24小时热门版块排行榜    

查看: 2087  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cathereen_li

新虫 (初入文坛)

[求助] 我要扩3kb的片段,人的GLDC基因,总是扩不出来,求大侠指点呀 已有2人参与

我要扩增3kb的片段,人的GLDC基因的cDNA,总是扩不出来,求大侠指点呀!!试过了各种办法,两步法也试过了,一开始用pfu酶,后来用taq酶,LA taq也用过了,都P不出来,用taqP出来了一个,但是大小不对。我的体系为25微升体系,程序与体系如下:94度,3分钟;94度,45秒,55度,40秒,72度3分半,30个循环;72度8分钟。体系:上下游引物各一微升,模板视浓度而定,一般为2到5微升,buffer为2.5微升,dNTP为1.5微升,酶为1微升,补水到25微升。小女子论坛新手,金币不太足,还请各位大侠多多包涵~~~~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱逍遥

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
检测cDNA的质量如何,如果不行重新合成模板
3楼2013-03-04 16:10:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

biosci

捐助贵宾 (知名作家)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流! 2013-03-04 22:22:15
你提的RNA质量如何?反转录酶质量怎么样,能否扩增3kb的片段
2楼2013-03-04 15:51:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haitian0625

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-04 22:22:07
刚用过pfu扩4kb,拙见:95度 5-10min; 95度 30'', 退火温度 30''-60'', 68度延伸 70''/80'', 35-40循环;68度 延伸6-8min. 引物浓度在10p即可。
4楼2013-03-04 21:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cathereen_li

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by haitian0625 at 2013-03-04 21:59:21
刚用过pfu扩4kb,拙见:95度 5-10min; 95度 30'', 退火温度 30''-60'', 68度延伸 70''/80'', 35-40循环;68度 延伸6-8min. 引物浓度在10p即可。

谢谢您的回复!那您用的pfu酶是哪个公司生产的?我的是thermo家的
5楼2013-03-06 20:58:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +6 documentary 2026-08-10 6/300 2026-08-10 17:09 by wdc28
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] FileCode能看出啥? +4 要乐观耀哥 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:02 by 天神眷顾
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +16 且听虎啸 2026-08-07 23/1150 2026-08-10 12:35 by majunge000
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见