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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CHO细胞真核表达怎么总是假克隆呢
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yuanalice

银虫 (小有名气)

[求助] CHO细胞真核表达怎么总是假克隆呢

CHO细胞的真核表达，采用了CMV，PCI以及pCDNA5三种载体，转染后48小时免疫荧光检测有表达，问什么加压后虽然有圆形的细胞克隆产生，但是在进行免疫荧光检测却没有目的蛋白的表达呢，毕业在即，怎么办呢?
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1楼 2013-02-28 01:25:12
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叶倾意

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yuanalice: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-03-04 08:42:17
kozak 序列是很重要，但是你也可以先去查一下你的基因序列（包括质粒图谱），因为有的时候，基因插入你的质粒之后，就已经有了Kozak序列，而且我觉得kozak 只是影响表达量高低而不是影响表达量有无。按照ｌｚ的描述，你是瞬时转染之后检测有目的蛋白，但是稳定转染之后就没有了？　
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自知者智 自胜者勇 自暴者弃 自强者成
6楼2013-03-02 16:06:34
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yuanalice: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-02-28 10:05:48
你做的是融合蛋白吗，如果是，有可能是你插入的序列没有插好，导致了移码阅读。如果不是，有可能是你得基因序列有问题，有可能有突变发生。另外你有没有加KOZ引导序列。
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immunologyparasite
2楼2013-02-28 02:07:31
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yuanalice

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by robustli at 2013-02-28 02:07:31
你做的是融合蛋白吗，如果是，有可能是你插入的序列没有插好，导致了移码阅读。如果不是，有可能是你得基因序列有问题，有可能有突变发生。另外你有没有加KOZ引导序列。

移码阅读的话，免疫荧光不可能有荧光呀，这个KOZ序列很重要吗，我在一些文献上看到过，这是一个真核表达使用的一致的序列吗，是不是直接连接到起始密码子的前面呀！
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3楼2013-02-28 10:05:36
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是的，没有的话，可能就不能翻译了，ccacc直接加在atg前面。
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immunologyparasite
4楼2013-03-01 01:13:03
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