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yuanalice

银虫 (小有名气)

[求助] CHO细胞真核表达怎么总是假克隆呢

CHO细胞的真核表达,采用了CMV,PCI以及pCDNA5三种载体,转染后48小时免疫荧光检测有表达,问什么加压后虽然有圆形的细胞克隆产生,但是在进行免疫荧光检测却没有目的蛋白的表达呢,毕业在即,怎么办呢?
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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yuanalice: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-02-28 10:05:48
你做的是融合蛋白吗,如果是,有可能是你插入的序列没有插好,导致了移码阅读。如果不是,有可能是你得基因序列有问题,有可能有突变发生。另外你有没有加KOZ引导序列。
immunologyparasite
2楼2013-02-28 02:07:31
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yuanalice

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by robustli at 2013-02-28 02:07:31
你做的是融合蛋白吗,如果是,有可能是你插入的序列没有插好,导致了移码阅读。如果不是,有可能是你得基因序列有问题,有可能有突变发生。另外你有没有加KOZ引导序列。

移码阅读的话,免疫荧光不可能有荧光呀,这个KOZ序列很重要吗,我在一些文献上看到过,这是一个真核表达使用的一致的序列吗,是不是直接连接到起始密码子的前面呀!
3楼2013-02-28 10:05:36
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是的,没有的话,可能就不能翻译了,ccacc直接加在atg前面。
immunologyparasite
4楼2013-03-01 01:13:03
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yuanalice

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by robustli at 2013-03-01 01:13:03
是的,没有的话,可能就不能翻译了,ccacc直接加在atg前面。

这个序列是通用的吗
5楼2013-03-01 21:44:27
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叶倾意

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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yuanalice: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-03-04 08:42:17
kozak 序列是很重要,但是你也可以先去查一下你的基因序列(包括质粒图谱),因为有的时候,基因插入你的质粒之后,就已经有了Kozak序列,而且我觉得kozak 只是影响表达量高低而不是影响表达量有无。按照lz的描述,你是瞬时转染之后检测有目的蛋白,但是稳定转染之后就没有了? 
自知者智 自胜者勇 自暴者弃 自强者成
6楼2013-03-02 16:06:34
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希罗雅

银虫 (小有名气)

你好  你有CMV5的载体信息吗
凡事学习
7楼2015-05-07 13:31:38
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