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sirius8981

木虫 (正式写手)

[求助] 关于不同酶的PCR回火,退火温度

小弟想测cricket的wingless基因,blast上就一条Gb cricket的全长基因,其他就一条,也才是部分片段。
设计引物未果下,用另一篇文章的mantis的wingless基因的引物。

请问:

1)我用KOD Neo酶,     (循环)98 10s; tm 30s; 68 30s/kb;(使用说明)
该mantis文章作者写的是 (循环)95 30s; 55 30s; 72 1 min;for mantis

请问,我应该如何用KOD酶的什么温度条件,pcr这段基因呢?谢谢
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
和引物序列与模板匹配程度有关吧。
蓝精灵
3楼2013-02-27 13:46:16
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查看全部 5 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR变性、延伸温度根据酶的使用说明书来,不同的酶不太一样。延伸时间与酶的效率和扩增片段大小有关。一般的taq DNA聚合酶是1kb/min,你需要参考目的片段大小及使用的酶的说明书。引物退火温度在标准条件下只和引物序列与模板匹配程度有关。如果反应体系改变了离子强度,引物退火温度也会相应发生变化。
2楼2013-02-27 13:36:04
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juneily

新虫 (初入文坛)

楼主,你吧wingless基因扩增出来了吗?用的什么温度条件啊
4楼2013-05-16 16:43:32
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sirius8981

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by juneily at 2013-05-16 17:43:32
楼主,你吧wingless基因扩增出来了吗?用的什么温度条件啊

算是出来了吧。。。
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5楼2013-05-16 20:41:48
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