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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于不同酶的PCR回火，退火温度
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sirius8981

木虫 (正式写手)

[求助] 关于不同酶的PCR回火，退火温度

小弟想测cricket的wingless基因，blast上就一条Gb cricket的全长基因，其他就一条，也才是部分片段。
设计引物未果下，用另一篇文章的mantis的wingless基因的引物。

请问：

1）我用KOD Neo酶，     （循环）98 10s； tm 30s； 68 30s/kb；（使用说明）
该mantis文章作者写的是 （循环）95 30s； 55 30s； 72 1 min；for mantis

请问，我应该如何用KOD酶的什么温度条件，pcr这段基因呢？谢谢
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1楼 2013-02-27 13:04:56
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
和引物序列与模板匹配程度有关吧。
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蓝精灵
3楼2013-02-27 13:46:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR变性、延伸温度根据酶的使用说明书来，不同的酶不太一样。延伸时间与酶的效率和扩增片段大小有关。一般的taq DNA聚合酶是1kb/min，你需要参考目的片段大小及使用的酶的说明书。引物退火温度在标准条件下只和引物序列与模板匹配程度有关。如果反应体系改变了离子强度，引物退火温度也会相应发生变化。
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2楼2013-02-27 13:36:04
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juneily

新虫 (初入文坛)
楼主，你吧wingless基因扩增出来了吗？用的什么温度条件啊
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4楼2013-05-16 16:43:32
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sirius8981

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by juneily at 2013-05-16 17:43:32
楼主，你吧wingless基因扩增出来了吗？用的什么温度条件啊

算是出来了吧。。。
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5楼2013-05-16 20:41:48
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