应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 咨询个问题，有做过接合转移的高人吗
51/1返回列表
查看: 1871  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

chuxuan

铜虫 (正式写手)

[求助] 咨询个问题，有做过接合转移的高人吗

我构建了一个载体（载体含克隆了菌的两个同源臂，要插入的基因在两个同源臂之间）
用这个载体与菌进行接合转移（进行同源重组）
可是一直没办法成功。
我不知道是什么原因。。。。
有没有高人给点意见啊
(做接合的菌不是原始菌株，而是经过改造的工业菌株。。以前有师姐用原始菌株做过，可以的。。我现在就是想将这个高产的工业菌株，在用构建的载体来试下，看能否提高产量。。。。。可是就是没成功）
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-02-21 16:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chuxuan

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2013-02-22 21:08:52
你最好有个详细的实验步骤，这样方便大家帮你分析，有时一个实验细节决定了试验的成败。...

我做接合的时候，步骤差不多是这样的
1、两菌养到对数期
2、各取3ML到EP管，离心
3、用LB洗两次
4、洗完之后就用LB悬浮
5、供体菌与受体菌差不多1:1进行混合
6、涂布到LB平板预培养6个小时
7、培养完之后，再将平板上长得菌用LB洗下来，涂布到菌特定的培养平板上。。这样就完了。。。。
赞一下 回复此楼
9楼2013-02-22 21:14:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

monson2008

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
载体是什么性质的?自杀质粒还是稳定遗传的?
赞一下 回复此楼
2楼2013-02-22 11:12:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你构建的质粒，有抗生素标记吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-02-22 12:15:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chuxuan

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by monson2008 at 2013-02-22 11:12:37
载体是什么性质的?自杀质粒还是稳定遗传的?

是自杀性载体。。。。有时候做接合之后，有长出来接合子。。但怎么长的是大肠。。。。
赞一下 回复此楼
4楼2013-02-22 12:30:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 21:13 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 21:02 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 20:56 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:34 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:18 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 5/250 2026-11-10 19:56 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 5/250 2026-11-10 19:45 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 19:39 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 申请环境，微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-10 09:23 by 1yv6QACPoY1E
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 01:29 by FChKX8meu1ds
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭