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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于大肠与链霉菌接合转移的问题
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Earl_zw

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于大肠与链霉菌接合转移的问题

现在做链霉菌的基因敲除，质粒比较大，且不是整合型的。有什么好的方法可以提高结合转移效率吗？
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biosci

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1楼 2012-12-19 21:34:30
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sumoeric

金虫 (小有名气)
★
Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
楼主 可以尝试用菌丝体做一下，而不用孢子，不知道使用的是什么质粒，大小多大
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Earl_zw
4楼2012-12-20 09:00:55
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Earl_zw

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by sumoeric at 2012-12-20 09:00:55
楼主 可以尝试用菌丝体做一下，而不用孢子，不知道使用的是什么质粒，大小多大

我用的是supercos1.先是建的基因组文库，通过pcr-targeting对链霉菌做基因敲除。因为质粒上含有基因簇，大小40Kb吧！如果用菌丝体做的话，怎么收集菌丝体啊？用不用做特殊处理吗？
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5楼2012-12-20 13:09:03
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
你是用的结合转移吗？辅助质粒
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6楼2013-02-22 12:17:05
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txy8469393

木虫 (小有名气)
★
Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
为啥不做heterologous expression.
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7楼2013-09-09 01:59:13
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15261561986

金虫 (正式写手)
★
Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by Earl_zw at 2012-12-20 13:09:03
我用的是supercos1.先是建的基因组文库，通过pcr-targeting对链霉菌做基因敲除。因为质粒上含有基因簇，大小40Kb吧！如果用菌丝体做的话，怎么收集菌丝体啊？用不用做特殊处理吗？...

求指导supercos怎么做？有没有文献可以共享一下?我在做链霉菌的敲除，用pKC1139，感觉但交换和双交换有点慢
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8楼2017-01-17 15:51:43
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xu德德

新虫 (初入文坛)
★
Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
7楼: Originally posted by txy8469393 at 2013-09-09 01:59:13
为啥不做heterologous expression.

同源表达具体怎么个流程，麻烦您指导

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9楼2017-05-17 08:03:11
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茅塞顿开2楼
2012-12-19 21:48   回复  
Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
tangbohejin3楼
2012-12-19 22:10   回复  
Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
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