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Earl_zw

铜虫 (小有名气)


[交流] 关于大肠与链霉菌接合转移的问题

现在做链霉菌的基因敲除,质粒比较大,且不是整合型的。有什么好的方法可以提高结合转移效率吗?
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sumoeric

金虫 (小有名气)



Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
楼主 可以尝试用菌丝体做一下,而不用孢子,不知道使用的是什么质粒,大小多大

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-12-20 09:00:55
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Earl_zw

铜虫 (小有名气)


送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by sumoeric at 2012-12-20 09:00:55
楼主 可以尝试用菌丝体做一下,而不用孢子,不知道使用的是什么质粒,大小多大

我用的是supercos1.先是建的基因组文库,通过pcr-targeting对链霉菌做基因敲除。因为质粒上含有基因簇,大小40Kb吧!如果用菌丝体做的话,怎么收集菌丝体啊?用不用做特殊处理吗?
5楼2012-12-20 13:09:03
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)



Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
你是用的结合转移吗?辅助质粒
6楼2013-02-22 12:17:05
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txy8469393

木虫 (小有名气)



Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
为啥不做heterologous expression.
7楼2013-09-09 01:59:13
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15261561986

金虫 (正式写手)



Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by Earl_zw at 2012-12-20 13:09:03
我用的是supercos1.先是建的基因组文库,通过pcr-targeting对链霉菌做基因敲除。因为质粒上含有基因簇,大小40Kb吧!如果用菌丝体做的话,怎么收集菌丝体啊?用不用做特殊处理吗?...

求指导supercos怎么做?有没有文献可以共享一下?我在做链霉菌的敲除,用pKC1139,感觉但交换和双交换有点慢
8楼2017-01-17 15:51:43
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xu德德

新虫 (初入文坛)



Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
7楼: Originally posted by txy8469393 at 2013-09-09 01:59:13
为啥不做heterologous expression.

同源表达具体怎么个流程,麻烦您指导

发自小木虫Android客户端
9楼2017-05-17 08:03:11
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简单回复
2012-12-19 21:48   回复  
Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
2012-12-19 22:10   回复  
Earl_zw(金币+1): 谢谢参与
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