24小时热门版块排行榜    

查看: 1437  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

chuxuan

铜虫 (正式写手)

[求助] 咨询个问题,有做过接合转移的高人吗

我构建了一个载体(载体含克隆了菌的两个同源臂,要插入的基因在两个同源臂之间)
用这个载体与菌进行接合转移(进行同源重组)
可是一直没办法成功。
我不知道是什么原因。。。。
有没有高人给点意见啊
(做接合的菌不是原始菌株,而是经过改造的工业菌株。。以前有师姐用原始菌株做过,可以的。。我现在就是想将这个高产的工业菌株,在用构建的载体来试下,看能否提高产量。。。。。可是就是没成功)
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
大肠杆菌和放线菌的接合转移吧。注意别用错抗生素。
6楼2013-02-22 20:09:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by chuxuan at 2013-02-22 20:48:59
别用错抗生素,大侠指教下。。。。抗生素用什么才是正确的。。...

你最好有个详细的实验步骤,这样方便大家帮你分析,有时一个实验细节决定了试验的成败。
8楼2013-02-22 21:08:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by chuxuan at 2013-02-22 21:14:23
我做接合的时候,步骤差不多是这样的
1、两菌养到对数期
2、各取3ML到EP管,离心
3、用LB洗两次
4、洗完之后就用LB悬浮
5、供体菌与受体菌差不多1:1进行混合
6、涂布到LB平板预培养6个小时
7、培养完之后, ...

不是标准的链霉菌接合转移方法,如果是链霉菌,建议参考PCR targeting protocol.
10楼2013-02-22 23:19:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by chuxuan at 2013-02-23 09:53:41
我的菌不是链霉菌。。这方法也是文献里面的。。。只是我的菌是工程菌。。。。原始菌这样做是可以结合成功的。...

那你摸索下抗生素的工作浓度。你的工程菌指基因工程菌还是诱变获得的?
12楼2013-02-23 10:43:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by chuxuan at 2013-02-23 10:46:51
是诱变获得的。。。不知道是不是被改造得不成样子。。遗传操作不可行了吗...

诱变获得的工程菌,有些遗传操作比较难做,尤其是基因敲除。
14楼2013-02-23 10:50:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chuxuan 的主题更新
信息提示
请填处理意见