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511484462

金虫 (小有名气)

学生

[求助] Gel-shift实验求助

小弟准备做Gel-shift实验，有一些不懂的事情，需要向各位求助下，希望大家多多帮助
1、Gel-shift 中所使用的蛋白需要纯化吗？
2、Gel-shift中所用蛋白的浓度有什么要求吗？如果蛋白的表达水平较低可以做Gel-shift吗？
3、在检测的时候可以使用蛋白的抗体来检测吗？
4、Gel-shift中使用的蛋白能用原核表达的真核蛋白吗？

谢谢大家的无私帮助！！！
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生物路上踟蹰前行的小蚂蚁
1楼 2013-01-21 10:21:08
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neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

2楼正解，follow it!
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有朋自网上来不亦乐乎
3楼2013-02-10 20:51:36
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xhy3587

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
511484462: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-25 11:35:15
1、Gel-shift 中所使用的蛋白需要纯化吗？
    不一定。核裂解液就可以。必要时用纯化的核酸结合蛋白。
2、Gel-shift中所用蛋白的浓度有什么要求吗？如果蛋白的表达水平较低可以做Gel-shift吗？
     看你用什么方法标记探针。用32P-标的话，核裂解液的总蛋白有2-10ug 即可。纯化蛋白可以更少。
3、在检测的时候可以使用蛋白的抗体来检测吗？
     当然。用抗体产生super-shift是定性结合蛋白的重要方法。
4、Gel-shift中使用的蛋白能用原核表达的真核蛋白吗？
     可以的。但是这些蛋白缺少翻译后修饰，如果蛋白与核酸之间的结合依赖于某种修饰，这种来源的蛋白就不合适。
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2楼2013-02-09 11:11:14
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511484462

金虫 (小有名气)

学生
引用回帖:
2楼: Originally posted by xhy3587 at 2013-02-09 11:11:14
1、Gel-shift 中所使用的蛋白需要纯化吗？
    不一定。核裂解液就可以。必要时用纯化的核酸结合蛋白。
2、Gel-shift中所用蛋白的浓度有什么要求吗？如果蛋白的表达水平较低可以做Gel-shift吗？
     看你用什么 ...

十分感谢您的细心讲解，这个实验我已经完成了，太晚给您评分，对不起啊！
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生物路上踟蹰前行的小蚂蚁
4楼2013-07-25 11:35:05
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