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511484462金虫 (小有名气)
学生
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[求助]
Gel-shift实验求助
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小弟准备做Gel-shift实验，有一些不懂的事情，需要向各位求助下，希望大家多多帮助 1、Gel-shift 中所使用的蛋白需要纯化吗？ 2、Gel-shift中所用蛋白的浓度有什么要求吗？如果蛋白的表达水平较低可以做Gel-shift吗？ 3、在检测的时候可以使用蛋白的抗体来检测吗？ 4、Gel-shift中使用的蛋白能用原核表达的真核蛋白吗？ 谢谢大家的无私帮助！！！ |
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neuralcrest
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3楼2013-02-10 20:51:36
【答案】应助回帖
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511484462: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-25 11:35:15
511484462: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-25 11:35:15
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1、Gel-shift 中所使用的蛋白需要纯化吗？ 不一定。核裂解液就可以。必要时用纯化的核酸结合蛋白。 2、Gel-shift中所用蛋白的浓度有什么要求吗？如果蛋白的表达水平较低可以做Gel-shift吗？ 看你用什么方法标记探针。用32P-标的话，核裂解液的总蛋白有2-10ug 即可。纯化蛋白可以更少。 3、在检测的时候可以使用蛋白的抗体来检测吗？ 当然。用抗体产生super-shift是定性结合蛋白的重要方法。 4、Gel-shift中使用的蛋白能用原核表达的真核蛋白吗？ 可以的。但是这些蛋白缺少翻译后修饰，如果蛋白与核酸之间的结合依赖于某种修饰，这种来源的蛋白就不合适。 |
2楼2013-02-09 11:11:14
511484462
金虫 (小有名气)
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4楼2013-07-25 11:35:05
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