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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lixuanli

铁虫 (初入文坛)

[求助] sds-page

只能用自己的相机拍,没别的设施

@冼亮淀粉酶
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回帖置顶 ( 共有2个 )

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-19 17:56:25
至于你的这个图片,虽然没有上maker,不知道大小,但条带我觉得普遍都挺弥散,这种效果的我也遇到过(见图片),但是我后来将要跑SDS-PAGE的蛋白质样品都加上样缓冲液煮5分钟,将所有制胶所用的试剂都放在4度冰箱,电泳的时候加冰降温,之后的效果就都达到我的要求了(见图片),你也这样试一下吧。预染的maker我也跑过,我觉得效果不好,不知道什么原因,也就不再用了。不过分子量越小的蛋白质跑得越久条带就越弥散是很正常的(看我的图片),可能不是用聚丙烯酰胺,用个别的什么材料来跑会压缩得挺好,因为我要的蛋白质分子量不很小,所以我没有用过。

差.jpg



2012.1.2 4合MonoQ,主2、2、4天,次2、3天,不同天数合疏离前、中、后、合并变性胶.jpg

流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2013-01-19 01:03:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-19 17:57:06
amisking: 回帖置顶 2013-01-19 17:57:08
引用回帖:
9楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2013-01-19 01:16:22
条带跑的不够平整
不知道 怎么回事...

条带不平整如果不是胶和电泳的问题的话多半和样品处理不好。因为你的marker也是和样品差不多,所以问题可能是胶做的不好或者是电泳的问题。其实SDS-PAGE对温度没什么严格的要求,如果想快点看结果我都是直接200v跑biorad的mini胶,条带一样是sharp的。当然如果可以用恒温跑的话会更好。做胶的各种成分,包括丙烯酰胺、Tris buffer、SDS配好后最好过滤,保证体系很均一。
11楼2013-01-19 07:56:15
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

LZ想问什么呢?
2楼2013-01-18 07:56:07
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
想问些什么啊?我们只能看到图片
3楼2013-01-18 09:29:36
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秋水素心

银虫 (小有名气)

楼主的图片没看到什么问题啊?
认真过好每一天!
4楼2013-01-18 17:00:48
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-01-19 01:03:51
至于你的这个图片,虽然没有上maker,不知道大小,但条带我觉得普遍都挺弥散,这种效果的我也遇到过(见图片),但是我后来将要跑SDS-PAGE的蛋白质样品都加上样缓冲液煮5分钟,将所有制胶所用的试剂都放在4度冰箱, ...

感谢中
maker 最少的是30
左边maker依次是30  40 60 80 100 150 200
只有最后一个个30kDa是预染的,其他的都是跑完之后染的
我要的蛋白也挺大的,70多kDa 就是maker 之后那个泳道的样品
我再重新配一下试剂,试一下你的方法 非常感谢
6楼2013-01-19 01:09:33
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-01-19 01:03:51
至于你的这个图片,虽然没有上maker,不知道大小,但条带我觉得普遍都挺弥散,这种效果的我也遇到过(见图片),但是我后来将要跑SDS-PAGE的蛋白质样品都加上样缓冲液煮5分钟,将所有制胶所用的试剂都放在4度冰箱, ...

还有就是 你用的是什么染色呢?
我用的是 blue silver  会和染色方法有关系吗
7楼2013-01-19 01:11:23
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-18 07:56:07
LZ想问什么呢?

条带跑的不够平整
不知道 怎么回事
8楼2013-01-19 01:16:13
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

引用回帖:
4楼: Originally posted by 秋水素心 at 2013-01-18 17:00:48
楼主的图片没看到什么问题啊?

条带跑的不够平整
不知道 怎么回事
9楼2013-01-19 01:16:22
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

我的是考马斯亮蓝染色
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
10楼2013-01-19 01:49:41
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