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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求高人指点qpcr问题，扩增效率太高！
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wl554520877

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求高人指点qpcr问题，扩增效率太高！

最近做荧光定量，问题重重，先是跑了个内参试试，做个标曲，结果出来了，扩增效率很高，达到200%，不过溶解曲线却是单一峰；还有就是ntc也有值，搞不明白，跑了个胶发现有条带应该是引物二聚体吧，我新手也不确定。上图吧，求分析，求帮助！
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只为毕业！没出息吧，呵呵~~
1楼 2013-01-14 21:05:07
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hubinghello

金虫 (小有名气)
我设计引物时选择有限，可能是非特异性扩增太严重。庆幸的是这个基因不重要我就没有再搞。
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去爱吧，像不曾爱过一样；跳舞吧，像没有人观看一样；唱歌吧，像没有人聆听一样；生活吧，像每天都是世界末日一样；赚钱吧，像不是为了钱一样。
7楼2013-01-15 10:51:07
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wl554520877

铁虫 (初入文坛)
另外一种图关于ntc的是附件一，传图片传漏了
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只为毕业！没出息吧，呵呵~~
2楼2013-01-14 21:08:04
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hubinghello

金虫 (小有名气)
同求！我曾经扩增效率到800%，问题还没解决。觉得是引物问题。
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去爱吧，像不曾爱过一样；跳舞吧，像没有人观看一样；唱歌吧，像没有人聆听一样；生活吧，像每天都是世界末日一样；赚钱吧，像不是为了钱一样。
3楼2013-01-14 22:23:03
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wl554520877

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hubinghello at 2013-01-14 22:23:03
同求！我曾经扩增效率到800%，问题还没解决。觉得是引物问题。

那么巧你也果树学？你用的是哪个公司的试剂还有仪器呢？
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只为毕业！没出息吧，呵呵~~
4楼2013-01-15 08:38:18
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