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[求助]
求高人指点qpcr问题，扩增效率太高！
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最近做荧光定量，问题重重，先是跑了个内参试试，做个标曲，结果出来了，扩增效率很高，达到200%，不过溶解曲线却是单一峰；还有就是ntc也有值，搞不明白，跑了个胶发现有条带应该是引物二聚体吧，我新手也不确定。上图吧，求分析，求帮助！ 4.jpg  2.jpg |
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2013-01-14 21:04:51, 131.92 K
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送鲜花一朵 
谢谢朋友，早上来看过帖子一拉没看到你的回复，抱歉！抱歉！引物用的是0.5uM，可以再调低点，试剂盒用的是0.4uM，退火温度我做了筛选跑出的结果都是扩增效率很高就没拿上来讨论，另外你讲的负对照没目标峰，我没加模版就应该是没有目标峰的吧。还有引物设计的问题我是用别人做过的，他做就可以，但这一直做不好我就开始有点质疑了，苦于水平太低，连引物我也不晓得怎么设计算好！苦闷，求讲解！ 
10楼2013-01-15 16:36:29
2楼2013-01-14 21:08:04
hubinghello
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
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- 虫号: 1506561
- 注册: 2011-11-23
- 性别: MM
- 专业: 林木遗传育种学
，问题还没解决。觉得是引物问题。 3楼2013-01-14 22:23:03
4楼2013-01-15 08:38:18
30