[求助] 衍生后HPLC测定葡萄糖用的什么内标

如题，一般用什么内标好呀？？
还有HPLC什么时候用内标什么时候用外标？？？

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1楼 2013-01-08 22:32:56

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ruiyi1101

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【答案】应助回帖

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内标物质需要稳定、同被测定组分峰完全分离（一般分离度大于2.0）；常用的内标有苯甲酸、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯等。

用内标法的好处：只要保证对照品溶液、样品溶液中加入的内标物的量（通常以准确量取一定体积的内标溶液），因为计算时是算被测组分峰面积与内标物峰面积的比值，所以对照品溶液、样品溶液的最终稀释体积即使不同，也不会影响测试结果准确性（当然是在对照品、样品的称量准确的前提下）。比如：我们用柱前衍生化法测试样品，衍生化过程中需要加热，对照品溶液、样品溶液的最终体积无法确保完全一致，但是只要保证用于衍生化反应的对照品溶液、样品溶液的量一定，加入内标物的量一定就可以保证测试结果的准确，具体实例可以看一下Waters ACCQ_Tag 氨基酸测试。

既然用内标法有上述的好处，但为啥大多数情况下我们还是更多地用外标法的原因是（我个人认为）：
1. 加入的内标物与组分峰的分离需要考虑，毕竟增加了一种物质，HPLC分离的难度也会相应增加；
2. 内标物是否会与被测物有相互作用，干扰检测结果需要研究，并且在方法验证时用数据证明的；

希望对你有帮助！

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