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新虫 (初入文坛)

[求助] 衍生后HPLC测定葡萄糖用的什么内标

如题,一般用什么内标好呀??
还有HPLC什么时候用内标什么时候用外标???
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ruiyi1101

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+2, 感谢应助,欢迎常来分析版交流~ 2013-01-09 20:13:11
内标物质需要稳定、同被测定组分峰完全分离(一般分离度大于2.0);常用的内标有苯甲酸、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯等。

用内标法的好处:只要保证对照品溶液、样品溶液中加入的内标物的量(通常以准确量取一定体积的内标溶液),因为计算时是算被测组分峰面积与内标物峰面积的比值,所以对照品溶液、样品溶液的最终稀释体积即使不同,也不会影响测试结果准确性(当然是在对照品、样品的称量准确的前提下)。比如:我们用柱前衍生化法测试样品,衍生化过程中需要加热,对照品溶液、样品溶液的最终体积无法确保完全一致,但是只要保证用于衍生化反应的对照品溶液、样品溶液的量一定,加入内标物的量一定就可以保证测试结果的准确,具体实例可以看一下Waters ACCQ_Tag 氨基酸测试。

既然用内标法有上述的好处,但为啥大多数情况下我们还是更多地用外标法的原因是(我个人认为):
1. 加入的内标物与组分峰的分离需要考虑,毕竟增加了一种物质,HPLC分离的难度也会相应增加;
2. 内标物是否会与被测物有相互作用,干扰检测结果需要研究,并且在方法验证时用数据证明的;

希望对你有帮助!
2楼2013-01-09 10:49:43
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