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will-jiang

金虫 (初入文坛)

[求助] 镍磁珠洗脱蛋白的问题

今天使用镍磁珠提取蛋白,后来跑胶发现目的蛋白是提出来了,可是洗脱液中的蛋白含量很少,说明蛋白还绑在镍磁珠上没有被洗脱下来,请问下这是什么原因呢?是洗脱液和洗涤液的问题么?
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-01-06 05:56:19
will-jiang: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2013-01-06 22:03:39
如果elute液中的目的蛋白少,你先要确定目的蛋白是还结合在磁珠上,还是在wash磁珠的时候就损失掉了。你应该有预留组分吧,可以做western检测一下。如果是前者,可以再次elute磁珠或者增加elute buffer中咪唑浓度;如果是后者,需要降低wash buffer中咪唑浓度。
2楼2013-01-06 02:31:45
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fhda142

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
will-jiang: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-06 22:03:50
楼上正解,还要注意下elute buffer的PH。
3楼2013-01-06 12:19:56
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will-jiang

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-06 02:31:45
如果elute液中的目的蛋白少,你先要确定目的蛋白是还结合在磁珠上,还是在wash磁珠的时候就损失掉了。你应该有预留组分吧,可以做western检测一下。如果是前者,可以再次elute磁珠或者增加elute buffer中咪唑浓度; ...

多谢指点~我马上去试验下
4楼2013-01-06 22:03:26
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will-jiang

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fhda142 at 2013-01-06 12:19:56
楼上正解,还要注意下elute buffer的PH。

多谢!
5楼2013-01-06 22:04:00
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一步一步

木虫 (著名写手)

Western Blot检测灵敏度很高,所以建议直接跑PAGE
6楼2013-01-07 17:20:52
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