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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 镍磁珠洗脱蛋白的问题
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will-jiang

金虫 (初入文坛)

[求助] 镍磁珠洗脱蛋白的问题

今天使用镍磁珠提取蛋白，后来跑胶发现目的蛋白是提出来了，可是洗脱液中的蛋白含量很少，说明蛋白还绑在镍磁珠上没有被洗脱下来，请问下这是什么原因呢？是洗脱液和洗涤液的问题么？
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1楼2013-01-05 21:44:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-01-06 05:56:19
will-jiang: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2013-01-06 22:03:39
如果elute液中的目的蛋白少，你先要确定目的蛋白是还结合在磁珠上，还是在wash磁珠的时候就损失掉了。你应该有预留组分吧，可以做western检测一下。如果是前者，可以再次elute磁珠或者增加elute buffer中咪唑浓度；如果是后者，需要降低wash buffer中咪唑浓度。
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2楼2013-01-06 02:31:45
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fhda142

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
will-jiang: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-06 22:03:50
楼上正解，还要注意下elute buffer的PH。
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3楼2013-01-06 12:19:56
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will-jiang

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-06 02:31:45
如果elute液中的目的蛋白少，你先要确定目的蛋白是还结合在磁珠上，还是在wash磁珠的时候就损失掉了。你应该有预留组分吧，可以做western检测一下。如果是前者，可以再次elute磁珠或者增加elute buffer中咪唑浓度； ...

多谢指点~我马上去试验下
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4楼2013-01-06 22:03:26
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will-jiang

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fhda142 at 2013-01-06 12:19:56
楼上正解，还要注意下elute buffer的PH。

多谢！
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5楼2013-01-06 22:04:00
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一步一步

木虫 (著名写手)
Western Blot检测灵敏度很高，所以建议直接跑PAGE
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6楼2013-01-07 17:20:52
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