8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-06 13:58:21
你说的非特异条带是在野生型还是突变株里扩出来的？是引物的问题吗？你敲除的目的基因是否有其它同源基因呢？...

11楼: Originally posted by 碧海行帆 at 2013-01-06 18:02:56
非特异性带是突变株扩出来的，是做上下游验证用的，不是扩目的基因，引物换过了，还是一样啊。...

12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-07 02:42:44
你是说野生型是单一条带，但突变株是很多杂带？杂带中有野生型的条带吗？上个图分析一下吧。...

13楼: Originally posted by 碧海行帆 at 2013-01-07 09:05:44
12.11.26(zhuanhuazi xiayou yanzheng-2).jpg(14.74KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4Dfbg2B3qUAQA2e6?p=130497
第一道为mark 第2道到第6道为5个转化子做下游验证，最亮的和我要的目的带大小类似，但杂带很多， ...

14楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-07 11:22:56
没有野生对照吗？这些杂带包括野生的带么？还有我怀疑你PCR时候的模板量太大，所以特异性不行。你用了多少DNA模板？...

15楼: Originally posted by 碧海行帆 at 2013-01-07 14:47:12
第六道为野生型，最亮的带应该符合下游验证的大小，DNA的浓度都是提完后，加30-100ul，用的时候再稀释10倍，以前都是这么做的啊，能留下QQ进步交流下吗...

3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-06 02:27:42
如果有抗性基因而要敲除的基因还在的话才有问题，那说明不能用抗性基因来筛选目的基因了。此外，我觉得你最好不要用PCR负结果来证明敲除基因不在了，应该用敲除基因序列两端的DNA序列做PCR，确定突变株的带（含抗性 ...

17楼: Originally posted by songna1987 at 2013-05-11 21:39:13
我也是做敲除，也是用潮霉素做筛选，得到了一百多个转化子，用潮霉素筛选都能长，但是PCR就是没检测到，我也很奇怪呢，既然能抗潮霉素为什么检测不到呢？